不同基因型弓形蟲成囊株感染大鼠腹腔巨噬細胞誘導Arg-1合成機制的研究.pdf

1、目的：用弓形蟲基因II型蟲株PRU株和本實驗分離得到的Chinese1型成囊株分別感染體外分離培養(yǎng)的大鼠腹腔巨噬細胞,觀察不同基因型弓形蟲誘導大鼠腹腔巨噬細胞表達精氨酸酶的通路和機制。
　　方法：將體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細胞感染弓形蟲typeII基因型PRU株和Chinese1基因型TgCtwh6株,檢測Arg-1的表達;用siRNA分別沉默參與Arg-1基因轉錄的轉錄因子Stat6和C/EBPβ,并檢測沉默效率。沉默48h后

2、感染PRU株和TgCtwh6株,按照各實驗時間點收集RNA和蛋白標本,檢測Arg-1基因的表達。將體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細胞用地塞米松誘導12h后,檢測Arg-1的表達和上清NO的合成。在地塞米松作用12h后感染PRU株和TgCtwh6株,繼續(xù)用含地塞米松的培養(yǎng)基的培養(yǎng),按照實驗時間點收集RNA和蛋白質,檢測Arg-1的表達。
　　結果：
　　(1)體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細胞感染弓形蟲typeII基因型PRU株和Ch

3、inese1基因型TgCtwh6株,Arg-1在mRNA水平和蛋白水平均有表達;
　　(2)siRNA沉默下調Arg-1基因轉錄的轉錄因子STAT6和C/EBPβ,沉默效率為50％-60%。巨噬細胞經siRNA轉染,沉默STAT6和C/EBPβ48hr后,分別感染PRU株和TgCtwh6株。結果PRU感染組中,STAT6沉默后Arg-1表達無明顯改變,而C/EBPβ沉默的巨噬細胞內Arg-1表達顯著下調;TgCtwh6感染組中,S

4、TAT6沉默的巨噬細胞內Arg-1表達明顯下調,而C/EBPβ沉默的巨噬細胞Arg-1表達無明顯變化。
　　(3)將體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細胞用地塞米松誘導培養(yǎng),12h后細胞Arg-1的表達和NO的產生均顯著下降。此后將上述巨噬細胞分別感染PRU株和TgCtwh6株,結果顯示Arg-1的表達受到抑制。
　　結論：
　　1.弓形蟲typeII基因型PRU株和Chinese1基因型TgCtwh6株通過不同的途徑使巨噬細

5、胞表達Arg-1。提示PRU株感染可誘導經典途徑活化的巨噬細胞(classic allyactivated macrophage,CAM,M1)Arg-1,此途徑不依賴于STAT6而依賴C/EBPβ;相反,TgCtwh6株感染可能誘導旁路途徑活化的巨噬細胞(alternatively activated macrophage,AAM,M2)Arg-1,此途徑依賴于Stat6。
　　2.地塞米松可以明顯抑制大鼠腹腔巨噬細胞NO的合成