不同基因型弓形蟲(chóng)成囊株感染大鼠腹腔巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)Arg-1合成機(jī)制的研究.pdf

1、目的：用弓形蟲(chóng)基因II型蟲(chóng)株P(guān)RU株和本實(shí)驗(yàn)分離得到的Chinese1型成囊株分別感染體外分離培養(yǎng)的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞,觀察不同基因型弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞表達(dá)精氨酸酶的通路和機(jī)制。
　　方法：將體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細(xì)胞感染弓形蟲(chóng)typeII基因型PRU株和Chinese1基因型TgCtwh6株,檢測(cè)Arg-1的表達(dá);用siRNA分別沉默參與Arg-1基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子Stat6和C/EBPβ,并檢測(cè)沉默效率。沉默48h后

2、感染PRU株和TgCtwh6株,按照各實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)收集RNA和蛋白標(biāo)本,檢測(cè)Arg-1基因的表達(dá)。將體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細(xì)胞用地塞米松誘導(dǎo)12h后,檢測(cè)Arg-1的表達(dá)和上清NO的合成。在地塞米松作用12h后感染PRU株和TgCtwh6株,繼續(xù)用含地塞米松的培養(yǎng)基的培養(yǎng),按照實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)收集RNA和蛋白質(zhì),檢測(cè)Arg-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細(xì)胞感染弓形蟲(chóng)typeII基因型PRU株和Ch

3、inese1基因型TgCtwh6株,Arg-1在mRNA水平和蛋白水平均有表達(dá);
　　(2)siRNA沉默下調(diào)Arg-1基因轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子STAT6和C/EBPβ,沉默效率為50％-60%。巨噬細(xì)胞經(jīng)siRNA轉(zhuǎn)染,沉默STAT6和C/EBPβ48hr后,分別感染PRU株和TgCtwh6株。結(jié)果PRU感染組中,STAT6沉默后Arg-1表達(dá)無(wú)明顯改變,而C/EBPβ沉默的巨噬細(xì)胞內(nèi)Arg-1表達(dá)顯著下調(diào);TgCtwh6感染組中,S

4、TAT6沉默的巨噬細(xì)胞內(nèi)Arg-1表達(dá)明顯下調(diào),而C/EBPβ沉默的巨噬細(xì)胞Arg-1表達(dá)無(wú)明顯變化。
　　(3)將體外培養(yǎng)的原代大鼠腹腔巨噬細(xì)胞用地塞米松誘導(dǎo)培養(yǎng),12h后細(xì)胞Arg-1的表達(dá)和NO的產(chǎn)生均顯著下降。此后將上述巨噬細(xì)胞分別感染PRU株和TgCtwh6株,結(jié)果顯示Arg-1的表達(dá)受到抑制。
　　結(jié)論：
　　1.弓形蟲(chóng)typeII基因型PRU株和Chinese1基因型TgCtwh6株通過(guò)不同的途徑使巨噬細(xì)

5、胞表達(dá)Arg-1。提示PRU株感染可誘導(dǎo)經(jīng)典途徑活化的巨噬細(xì)胞(classic allyactivated macrophage,CAM,M1)Arg-1,此途徑不依賴于STAT6而依賴C/EBPβ;相反,TgCtwh6株感染可能誘導(dǎo)旁路途徑活化的巨噬細(xì)胞(alternatively activated macrophage,AAM,M2)Arg-1,此途徑依賴于Stat6。
　　2.地塞米松可以明顯抑制大鼠腹腔巨噬細(xì)胞NO的合成