抗人VEGF發(fā)卡狀核酶治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的采用脂質(zhì)體法將抗人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)發(fā)卡狀核酶轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞，研究抗人VEGF發(fā)卡狀核酶對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721生物學(xué)特性和裸鼠肝癌移植瘤的影響。 方法合成針對(duì)人VEGF的發(fā)卡狀核酶(以下簡(jiǎn)稱RZ)，定向克隆于真核表達(dá)載體pcDNA3．1+中；經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定后，用脂質(zhì)體法將pcDNA3．I+／RZ轉(zhuǎn)染8MMC-772l肝癌細(xì)胞，經(jīng)G418(500p．g／m1)加壓篩選獲得抗性細(xì)胞株，基因組DNA法和RT-PC

2、R法鑒定其在肝癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)；MTT法分析RZ對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖的影響，半定量RT-PCR法和ELISA法觀察對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響；用FCM分析其對(duì)SMMC-7721細(xì)胞凋亡的影響。接種RZ組和空載體組肝癌細(xì)胞于裸鼠皮下，觀察成瘤時(shí)間、腫瘤體積和重量變化，免疫組化法觀測(cè)腫瘤組織微血管變化及VEGF表達(dá)變化。 結(jié)果獲得pcDNA3．I+／RZ重組真核表達(dá)載體和SMMC-7721／RZ轉(zhuǎn)基因細(xì)