中藥不同組方對胃癌前病變模型大鼠胃粘膜組織細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、慢性萎縮性胃炎是由多種因素所致的消化系統(tǒng)常見病，尤其是胃竇萎縮性胃炎與胃癌關(guān)系密切[1，2]，所以又稱為胃癌前狀態(tài)性疾病。胃癌前病變系一病理學(xué)概念，是指胃粘膜上皮不典型增生（異型增生、上皮內(nèi)瘤變）。不典型增生分為輕度（低級別）、重度（高級別）二級，異型增生（上皮內(nèi)瘤變）是重要的胃癌癌前病變。2006年中國慢性胃炎共識意見中指出“小腸型和完全性腸化亞型無明顯癌前病變的意義，臨床實(shí)踐顯示單從腸化亞型的病理形態(tài)學(xué)難以作出胃癌危險性的預(yù)測，而且

2、十多年來，從大腸型腸化發(fā)展成胃癌的報(bào)道較為少見。所以，胃癌前病變的真正病理學(xué)特征性變化是異型增生（或稱上皮內(nèi)瘤）。”所以，針對慢性萎縮性胃炎伴不典型增生的研究，對于胃癌的二級預(yù)防具有更加重要的意義。
　　 目的：中藥治療慢性萎縮性胃炎伴不典型增生有著較為理想的療效，而且大量研究表明慢性萎縮性胃炎伴不典型增生以脾虛、血瘀為主要中醫(yī)臨床證型。我們采用熱鹽水合并化學(xué)藥物刺激的方法復(fù)制了慢性萎縮性胃炎伴不典型增生的大鼠模型，應(yīng)用益氣化瘀

3、、健脾益氣、活血化瘀中藥及西藥維霉素預(yù)防和治療給藥，探討不同組方中藥對慢性萎縮性胃炎伴不典型增生大鼠胃粘膜形態(tài)、組織學(xué)改變的影響，以其探討不同組方中藥的作用機(jī)制，及它們之間的相互關(guān)系。
　　 材料與方法：
　　 1.采用化學(xué)藥物刺激的方法復(fù)制了復(fù)制了慢性萎縮性胃炎癌前病變動物模型及分組治療。普通級，健康Wister大鼠120只，雌雄各半，體重160±5 g，將大鼠隨機(jī)分為11組，分別為正常組、造模組、健脾益氣方藥預(yù)防組、

4、活血化瘀方藥預(yù)防組、健脾化瘀方藥預(yù)防組、西藥預(yù)防組、造?？瞻捉M、健脾益氣方藥治療組、活血化瘀方藥治療組、健脾化瘀方藥治療組、西藥治療組。除正常組10只外，其余各組均11只。150g/L、55℃熱鹽水，10ml·kg-1·d-1，灌胃；2％水楊酸溶液10ml·Kg-1·d-1，灌胃；均為1次/d；20mmol/L脫氧膽酸鈉溶液，自由飲用；配以饑飽失常處理，即2d飽食，1d禁食。按上述方法造模12周。健脾益氣方藥預(yù)防組、活血化瘀方藥預(yù)防組、

5、健脾化瘀方藥預(yù)防組均同時灌服中藥制劑6g/kg、4g/kg、8g/kg，西藥預(yù)防組同時灌服灌服西藥維酶素1g/kg，連續(xù)給藥12周，12周后模型組、健脾益氣方藥預(yù)防組、活血化瘀方藥預(yù)防組、健脾化瘀方藥預(yù)防組、西藥預(yù)防組處死大鼠取材處理。造?？瞻捉M、健脾益氣方藥治療組、活血化瘀方藥治療組、健牌化瘀方藥治療組、西藥治療組開始分別給予雙蒸水（3ml/只）、中藥制劑、西藥維霉素，劑量同上，滿24周后，處死全部大鼠，取材處理。
　　 2.

6、觀察了大鼠模型胃粘膜病理形態(tài)變化。
　　 3.用免疫組化的方法檢測胃粘膜組織bcl-2的表達(dá)的變化，用流式細(xì)胞儀檢測胃組織中活性氧（ROS）、Ca2+含量的變化，用酶標(biāo)儀檢測胃組織中Caspase-3表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.造模對照組異型增生發(fā)病率100％，要高于健脾益氣預(yù)防組、活血化淤預(yù)防組、健脾化淤預(yù)防組、西藥預(yù)防組不典型增生發(fā)生率（71.4％、66.6％、12.5％、62.5％），且中藥及西藥

7、預(yù)防組不典型增生病例多發(fā)生在輕度不典型增生，健脾益氣預(yù)防組、活血化淤預(yù)防組、健脾化淤預(yù)防組、西藥組輕度不典型增生發(fā)生率分別為分別為80％、50％、100％、60％，而病理對照組全部為中、重度不典型增生。健脾益氣預(yù)防組、活血化瘀預(yù)防組、健脾化瘀預(yù)防組與西藥預(yù)防組之間比較無顯著性差異（P>0.05）。健脾化瘀中藥組中有87.5％都未發(fā)病，要好于其他幾組，但是統(tǒng)計(jì)學(xué)處理時與其他幾組無顯著差異，考慮系例數(shù)較少造成的。在治療給藥過程中，造?？瞻捉M

8、大鼠胃粘膜不典型增生經(jīng)12周的正常飼養(yǎng)，病理損傷無改善，經(jīng)中藥及維酶素連續(xù)12周的灌胃治療，胃粘膜不典型增生發(fā)生率明顯低于造模對照組（P<0.05），且治療組病變程度均較輕，各組多為輕度不典型增生（62.5％、55.6％、100％、50％），而造模對照組中、重度不典型增生發(fā)病率為100％，中藥治療各組及維酶素組間無顯著性差異（P>0.05）。健脾化淤治療組中有75％都已經(jīng)正常，要高于其他各組，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)處理時與其他幾組比較無顯著性差異，

9、考慮系樣本數(shù)量較小造成的。
　　 2.BCL-2基因在正常胃粘膜、輕、中、重度不典型增生中，其表達(dá)率隨病變加重逐級增高。在正常胃粘膜中，Bcl-2陽性率為12.5％，在造模組及造?？瞻捉M中，中、重度不典型增生的發(fā)生率均為100％，Bcl-2的陽性率分別為90％、87.5％，經(jīng)各組方中藥和西藥預(yù)防、治療給藥后，隨著不典型增生程度的下降，Bcl-2表達(dá)的陽性率亦在下降，在預(yù)防給藥組，健脾、化瘀、健脾化瘀、西藥組的不典型增生率分別為7

10、1.4％、66.6％、12.5％、62.5％，且多集中在輕度不典型增生（80％、50％、100％、60％），與之相伴的Bcl-2表達(dá)陽性率也下降（57.1％、55.5％、12.5％、50％）。在治療給藥組，健脾、化瘀、健脾化瘀、西藥組的不典型增生發(fā)生率分別為（88.8％、90％、25％、75％），輕度不典型增生的發(fā)生率為62.5％、55.6％、100％、50％，與之相應(yīng)的Bcl-2表達(dá)陽性率分別為55.5％、60％、25％、50％。而且

11、無論是預(yù)防給藥還是治療給藥，中藥各組及維酶素組，BCL-2基因的表達(dá)均較造模組及造?？瞻捉M減少。而且無論是預(yù)防給藥還是治療給藥，健脾化瘀組領(lǐng)的療效要好于益氣健脾和活血化瘀。
　　 3.造模組及造?？瞻捉M大鼠胃粘膜細(xì)胞中的Caspase-3明顯減少，與正常組比較有顯著差異（P<0.05），在預(yù)防組中，健脾化瘀組、健脾益氣組、活血化瘀組及西藥組均可以使Caspase-3的表達(dá)增加，與造模組比較有顯著差異（P<0.05），健脾化瘀組要

12、好于其他組，而健脾益氣組、活血化瘀組、西藥組之間沒有顯著差異（P>0.05）。在治療組中，健脾化瘀組、健脾益氣組、活血化瘀組及西藥組也均可以使Caspase-3的表達(dá)增加，與造模空白組比較有顯著差異（P<0.05），健脾化瘀組要好于其他組，而健脾益氣組、活血化瘀組、西藥組之間沒有顯著差異（P>0.05）。
　　 4.模型組大鼠ROS及Ca2+含量明顯下降，與空白對照組之間有顯著差異（P<0.05），而無論是預(yù)防給藥，還是治療給藥

13、，中藥組和西藥組均可以提高ROS及C2+含量，與造模組大鼠之間有顯著性差異（P<0.05），無論是預(yù)防給藥還是治療給藥，健脾化瘀組、西藥組之間的療效無差別（P>0.05），兩組與正常組之間亦無顯著性差異（P>0.05），而兩組與健脾組、化瘀組比較有顯著性差異（P<0.05），前者的療效要好于后者，健脾組與化瘀組比較無顯著性差異（P>0.05）。通過結(jié)果，我們不難發(fā)現(xiàn)，隨著不典型增生程度的下降，ROS及Ca2+含量均出現(xiàn)相應(yīng)的減少。在正常

14、胃粘膜中ROS及Ca2+的含量最多，在造模組及造?？瞻捉M中，中、重度不典型增生的發(fā)生率為100％，而相應(yīng)的ROS及Ca2+的含量也降至最低。在預(yù)防給藥和治療給藥過程中，健脾化瘀組的作用要好于健脾益氣組和活血化瘀組（P<0.05），而健脾益氣組和活血化瘀組無論是預(yù)防給藥還是治療給藥之間沒有顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 無論是預(yù)防給藥還是治療給藥，健脾化瘀、健脾益氣、活血化瘀中藥均具有較顯著的預(yù)防和治療胃

15、粘膜上皮不典型增生作用。其療效機(jī)理主要是通過調(diào)低胃組織中的Bc1-2的基因表達(dá)、增加胃組織中活性氧（ROS）、Ca2+的含量，增加胃組織中Caspase-3的表達(dá)，在整個細(xì)胞凋亡的各個環(huán)節(jié)產(chǎn)生作用，從而使細(xì)胞凋亡增加，減輕細(xì)胞增殖狀態(tài)，達(dá)到治療萎縮性胃炎癌前病變，防止癌變的作用。在這個過程中，在檢測的三個環(huán)節(jié)中，健脾化瘀、健脾、化瘀中藥均可以發(fā)揮作用，說明在中藥治療萎縮性胃炎癌前病變的過程中具有相同的作用節(jié)點(diǎn)。健脾化瘀中藥的治療萎縮性胃