MMP-7，E-cadherin，VEGF的表達(dá)與賁門癌生物學(xué)行為的關(guān)系.pdf

1、 目的：本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，聯(lián)合檢測MMP-7，E-cadherin，VEGF在賁門癌和胃竇癌中的表達(dá)，探討它們的內(nèi)在聯(lián)系及它們與賁門癌生物學(xué)行為的關(guān)系。 方法：1.采用鏈霉菌抗生物素—過氧化物酶連接(S-P)免疫組織化學(xué)染色。染色步驟如下：(1)標(biāo)本蠟塊4μm連續(xù)切片；(2)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化；(3)高壓鍋法以檸檬酸鹽緩沖液中抗原修復(fù)，冷卻至室溫；(4)試劑A處理15分鐘以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性；(5)切

2、片在試劑B中孵育20分鐘，閉非特異位點(diǎn)；(6)棄血清，加50μl稀釋好的一抗，濕盒內(nèi)4℃過夜。(7)PBS沖洗，加50μl試劑C，置濕盒內(nèi)，室溫下20分鐘。(8)加50μl試劑D，室溫下孵育10分鐘。(9)加100μl新配制的DAB溶液，在顯微鏡下監(jiān)控下顯影，終止反應(yīng)。(10)自來水沖洗，蘇木素核復(fù)染5分鐘，鹽酸酒精酚化15秒。(11)梯度酒精脫水干躁，二甲苯透明。(12)中性樹脂固定。 結(jié)論：1.賁門癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于胃竇