骨基質(zhì)明膠臨床植入的免疫相關(guān)因子檢測(cè)研究（IFN-r、TGF-β1和GM-CSF）.pdf

1、本研究進(jìn)行多項(xiàng)細(xì)胞因子，包括白介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)等檢測(cè)，評(píng)估BMG臨床植入后的體液免疫狀態(tài)，進(jìn)而了解BMG的抗原性，用于排斥反應(yīng)的早期診斷，并希望由此發(fā)現(xiàn)某些特定的細(xì)胞因子是BMG的免疫標(biāo)志物，為BMG替代自體骨移植打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。 研究方法：本

2、研究分為兩個(gè)部分，第一部分為“BMG修復(fù)骨缺損”，第二部分是“細(xì)胞因子的檢測(cè)和分析”。 1.臨床應(yīng)用BMG修復(fù)骨缺損 1.1.BMG的制備：按照Urist方法改良后制成兩種，一種為條桿型，另一種為顆粒型，由我院骨科實(shí)驗(yàn)室制成分裝，鈷60(Co60)滅菌，貯存于-18℃待用。 1.2.BMG的掃描電鏡(SEM)觀測(cè)：垂直和平行膠原纖維走向作切面，制備試片、金屬鍍膜，在JSMT300型掃描電鏡下觀察BMG哈佛氏管及骨

3、陷窩的超微結(jié)構(gòu)。 1.3.使用方法：使用前按無(wú)菌操作將備用的BMG從包裝中取出，浸泡于75％酒精15-30分鐘，取出用生理鹽水沖洗后即可植入。 1.4.使用例數(shù)：20例 1.5.適應(yīng)征：既往健康，青壯年患者的骨折不愈合或延遲愈合。 2.細(xì)胞因子的檢測(cè)和分析 2.1.檢測(cè)時(shí)間：在BMG植入術(shù)前、術(shù)后1周、2周，分別采取血樣2ml。血清樣品可存于-20℃?zhèn)溆谩?2.2.本研究進(jìn)行多項(xiàng)細(xì)胞因子檢

4、測(cè)，本人參與并負(fù)責(zé)以下三種檢測(cè)：IFN-r、TGF-β1、GM-CSF。檢測(cè)方法：酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)(美國(guó)Endogen公司進(jìn)口產(chǎn)品)。ELISA：以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程為：樣品/標(biāo)準(zhǔn)品孵育準(zhǔn)備—(或加生物素)—加結(jié)合物與目的因子結(jié)合—加底物著色—加終止液停止反應(yīng)—讀取分光光度計(jì)450nm波長(zhǎng)吸光度值(OD值)—根據(jù)直線回歸方程標(biāo)準(zhǔn)曲線

5、得出其含量。 2.3每.一例BMG植入后均觀測(cè)術(shù)后1周的體溫變化，皮膚有無(wú)炎癥反應(yīng)及過(guò)敏反應(yīng)，局部淋巴結(jié)、脾臟是否腫大等改變，檢查血常規(guī)，注意傷口愈合等級(jí)，有無(wú)明顯腫脹、滲出，對(duì)滲出液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、涂片。 2.4本.研究為植入BMG前后進(jìn)行自身對(duì)照比較的小樣本配伍組設(shè)計(jì)(隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì))，可對(duì)所有測(cè)得的每組數(shù)據(jù)，運(yùn)用SAS6.12版軟件，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；得出均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，以X±S表示；進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)；如資料符

6、合正態(tài)性分布，方差齊，宜進(jìn)行方差分析并兩兩比較；如資料不符合上述參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析的的要求，可予隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的秩和檢驗(yàn)；P＜0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 研究結(jié)果： 1.BMG植入術(shù)后臨床觀測(cè)結(jié)果：應(yīng)用BMG20例，均為骨折愈合障礙、骨缺損病例。所有病例術(shù)后5d內(nèi)體溫在37.4℃-38.5℃，5d后體溫恢復(fù)正常。1例術(shù)后傷口滲出、分泌物，培養(yǎng)未見細(xì)菌生長(zhǎng)；19例傷口均甲級(jí)愈合，未見皮膚紅腫、發(fā)熱、滲出等炎癥反應(yīng)及皮疹、紅斑等過(guò)敏反

7、應(yīng)，淺表淋巴結(jié)、脾臟未觸及腫大。2例植骨術(shù)后骨不愈合，但經(jīng)過(guò)再手術(shù)第2次植入BMG，術(shù)后體溫正常，皮膚無(wú)紅腫，傷口甲級(jí)愈合，最后骨折完全愈合。 2.BMG掃描電鏡觀測(cè)結(jié)果：橫斷面見清晰的哈佛氏管及骨陷窩結(jié)構(gòu)，但未見血管內(nèi)皮組織和骨細(xì)胞?？v切面見清晰整齊的膠原纖維束，束間未見橫向及交叉連接束。 3.細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果：20例骨折愈合障礙病例TGF-β1、IFN-r、GM-CSF術(shù)前與術(shù)后1周或2周比較，差異均無(wú)顯著意義(P＞

8、0.05)，術(shù)后1周與術(shù)后2周比較，差異也無(wú)顯著性意義(P＞0.05)。 研究結(jié)論：本研究是國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題中的部分內(nèi)容，通過(guò)對(duì)BMG的電子顯微結(jié)構(gòu)、臨床植入觀察，細(xì)胞因子(TGF-β、GM-CSF和IFN-r)血清學(xué)檢測(cè)，進(jìn)一步從分子水平上探討B(tài)MG的免疫原性。掃描電鏡檢查顯示BMG哈佛氏管內(nèi)已無(wú)血管內(nèi)皮組織，陷窩內(nèi)骨細(xì)胞已溶解吸收消失；20例BMG治療骨折愈合障礙臨床觀察中，均表現(xiàn)為免疫耐受，最終骨折為完全愈合；三種