KDR為靶的反義寡核苷酸，siRNA篩選及活性評價.pdf

1、 反義寡核苷酸(asON)和新近發(fā)現(xiàn)的RNA干擾是基因治療和基因功能研究的有效工具。但由于靶基因mRNA二級結(jié)構(gòu)的存在，并不是所有的反義分子均可與之有效結(jié)合并阻斷靶基因表達。 血管內(nèi)皮生長因子受體-2(VEGFR-2/KDR)廣泛分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞，且分布于部分腫瘤細(xì)胞表面，通過兩個機制促進腫瘤發(fā)生發(fā)展。本研究擬分別采用計算機輔助設(shè)計聯(lián)合寡核苷酸芯片雜交、寡核苷酸庫雜交聯(lián)合寡核苷酸芯片雜交兩種篩選方法，在KDR mRNA全

2、長序列范圍內(nèi)篩選可與之高效、特異結(jié)合的反義寡核苷酸，并根據(jù)反義寡核苷酸相應(yīng)雜交靶位點設(shè)計并構(gòu)建可在細(xì)胞內(nèi)長期表達的短發(fā)卡狀小干擾RNA(siRNA)，在人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7內(nèi)觀察了asON，siRNA的抗腫瘤作用，并對阻斷KDR蛋白表達后，一些通路信號蛋白的表達變化作了初步探討；最后利用MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型探討了KDR反義寡核苷酸的體內(nèi)抗腫瘤作用，為之將來應(yīng)用于臨床提供實驗基礎(chǔ)。 方法：1.KDR基因的克隆。2.計算