內(nèi)源性大麻素對(duì)熱應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)效應(yīng).pdf

1、目的:內(nèi)源性大麻素通過(guò)激活G蛋白耦連的大麻素受體(CB1和CB2)而發(fā)揮對(duì)神經(jīng)、心血管、免疫等系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。此外,內(nèi)源性大麻素也具有抗炎、鎮(zhèn)痛等多種醫(yī)療用途,但其生理效應(yīng)尚未完全揭示。熱應(yīng)激反應(yīng)是細(xì)胞最重要的應(yīng)激保護(hù)機(jī)制之一,主要通過(guò)激活熱休克轉(zhuǎn)錄因子1而顯著增強(qiáng)包括分子伴侶機(jī)制在內(nèi)的多種保護(hù)機(jī)制。而內(nèi)源性大麻素對(duì)熱應(yīng)激反應(yīng)有無(wú)調(diào)節(jié)效應(yīng)及其機(jī)制如何,迄今國(guó)內(nèi)外尚無(wú)研究報(bào)道。本研究在文獻(xiàn)調(diào)研的基礎(chǔ)上,初步推測(cè)大麻素可能通過(guò)其受體對(duì)熱應(yīng)激

2、反應(yīng)產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。迄今國(guó)內(nèi)外尚無(wú)研究報(bào)道。本研究在文獻(xiàn)調(diào)研的基礎(chǔ)上,初步推測(cè)大麻素可能通過(guò)其受體對(duì)熱應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。為證實(shí)這一假設(shè),本研究擬以大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞株作為研究對(duì)象,觀察內(nèi)源性大麻素是否對(duì)其熱應(yīng)激反應(yīng)具有調(diào)節(jié)效應(yīng),并探索其相應(yīng)的受體機(jī)制;以期初步闡明內(nèi)源性大麻對(duì)熱應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)及機(jī)制,為內(nèi)源性大麻素的效應(yīng)及機(jī)制研究提供新思路和突破點(diǎn)。
　　 方法:選用大鼠膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?實(shí)驗(yàn)組共分4類(lèi),即熱應(yīng)激組(42

3、℃水浴1h)、熱應(yīng)激+內(nèi)源性大麻素(2-AG)處理組、熱應(yīng)激+2-AG+CB1受體特異性拮抗劑(AM251)或CB2受體特異性拮抗劑(AM630)處理組、以及各自的對(duì)照組;設(shè)3h、6h、12h、24h等4個(gè)時(shí)相點(diǎn)。①采用RT-PCR技術(shù),檢測(cè)熱應(yīng)激、熱應(yīng)激+2-AG、熱應(yīng)激+2-AG+大麻素受體抑制劑處理后HSP70 mRNA表達(dá)水平。②采用Western Blot技術(shù),檢測(cè)熱應(yīng)激、熱應(yīng)激+2-AG、熱應(yīng)激+2-AG+抑制劑處理后HSP

4、70蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:①C6細(xì)胞熱應(yīng)激處理后,分別于3h、6h、12h、24h檢測(cè)HSP70 mRNA及蛋白的變化。結(jié)果顯示,熱刺激后3h、6h、12h、24h,HSP70 mRNA和蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照組顯著增高,12h時(shí)增加最為顯著。②選擇熱應(yīng)激后12h為觀察時(shí)相點(diǎn),以10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L三種不同濃度的2-AG進(jìn)行處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn)10-5mol/L2-AG對(duì)熱刺激1h后HSP70

5、 mRNA、蛋白表達(dá)具有顯著促進(jìn)作用;而10-7mol/L、10-6mol/L2-AG則無(wú)此促進(jìn)效應(yīng)。③觀察熱刺激及10-5mol/L2-AG處理后,不同時(shí)相點(diǎn)HSP70 mRNA和蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)2-AG處理后HSP70 mRNA和蛋白表達(dá)在6h到達(dá)高峰,無(wú)2-AG處理對(duì)照組HSP70 mRNA和蛋白在12h到達(dá)高峰。④以CB1受體特異性拮抗劑(AM251)和CB2受體特異性拮抗劑(AM630)處理細(xì)胞后,檢測(cè)2-AG對(duì)HSP

6、70 tuRNA、蛋白表達(dá)的影響,結(jié)果顯示,AM251阻斷了2-AG對(duì)HSP70 mRNA和蛋白的促進(jìn)效應(yīng),而AM630無(wú)此效應(yīng)。
　　 結(jié)論:一定濃度的內(nèi)源性大麻素2-AG對(duì)熱刺激處理的C6細(xì)胞內(nèi)HSP70基因的表達(dá)有明顯促進(jìn)效應(yīng),表明2-AG可以參與調(diào)控細(xì)胞熱應(yīng)激反應(yīng);此促進(jìn)效應(yīng)可被CB1特異性受體抑制劑AM251所抑制,表明2-AG的抑制效應(yīng)是由CB1,而非CB2,信號(hào)通路所介導(dǎo)。本研究結(jié)果揭示了2-AG可能具備調(diào)控?zé)釕?yīng)激