轉(zhuǎn)染CTLA4Ig基因的同供體大鼠DC細胞對胰島移植物存活的影響.pdf

1、目的:觀察膠原酶消化法、Ficoll 400密度梯度離心法對大鼠胰島的分離純化效果.方法:用膠原酶法分離、Ficoll 400密度梯度離心法純化胰島.用DTZ法判定胰島的純度;用AO/PI法判定胰島存活率;用胰島素釋放試驗判定胰島功能.目的:探索樹突狀細胞(DC)及其前體的分離純化及其體外擴增的方法,為進一步研究樹突狀細胞的功能、特性及臨床應用提供技術方法.方法:無菌制備SD大鼠骨髓,先后用紅細胞裂解液、抗鼠CD4、CD8、B細胞單抗(

2、McAb)和補體溶液,依次去除紅細胞、T、B細胞、粒細胞和單核-巨噬細胞等混雜細胞而獲得純化的DC及其前體,又在粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細胞介素(IL-4)協(xié)同誘導下培育,DC前體分化發(fā)育成DC并擴增,形態(tài)學觀察、表型檢測、功能學實驗鑒定DC.目的:通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將CTLA4Ig基因轉(zhuǎn)染DCs,探討轉(zhuǎn)CTLA4Ig基因的樹突狀細胞(DCsRev)誘導T細胞免疫耐受的可能性.方法:通過重組逆轉(zhuǎn)錄病毒將目的基因C

3、TLA4Ig轉(zhuǎn)染到大鼠骨髓來源的DCs中,通過RT-PCR、免疫組化、Dot-ELISA方法檢測目的基因CTLA4Ig在DCs中的表達,通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢測DCsRev抑制T細胞免疫反應的能力.目的:研究轉(zhuǎn)染CTLA4Ig基因的同供體大鼠DC細胞對同種大鼠胰島移植的影響.方法:鏈尿菌素(STZ)60mg/kg體重腹腔內(nèi)注射制作SD大鼠糖尿病模型,膠原酶法分離、Ficoll 400密度梯度離心法純化胰島,GM-CSF+IL-