聯(lián)合轉染目的基因CTLA4-Ig和IDO對大鼠原位肝移植免疫耐受的實驗研究.pdf

1、目的:通過采用Kamada的“改良二袖套法”成功建立Wistar→SD大鼠組合原位肝移植模型，聯(lián)合轉染目的基因CTLA4-Ig和IDO，觀察該聯(lián)合基因誘導大鼠肝移植免疫耐受的研究并探討其相關機制。
　　方法:采用Kamada的“改良二袖套法”建立SD→SD（預實驗組 N=40）和Wistar→SD（實驗組 N=52）大鼠組合原位肝移植模型。將實驗鼠隨機均分成四組，每組13例，其中三組在冷缺血期經(jīng)門靜脈分別注入1ml攜帶不同目的基因

2、的質粒（1×1011/ml），空白對照組只注入1ml空白質粒（1×1011/ml），即：聯(lián)合組（pWBP-CTLA4-Ig-IDO）、CTLA4-Ig組（pWBP-CTLA4-Ig）、IDO組（pWBP-IDO）和空白對照組。術后兩周內觀察各組大鼠一般生存狀況（如精神狀態(tài)、飲食、活動量、黃疸及大小便顏色等）；術后第7天每組隨機挑選3只大鼠，采集腔靜脈或門靜脈血，檢測肝功能情況；收集肝臟左外葉組織制片，觀察比較各組肝臟組織病理改變情況；采

3、用ELAST法檢測大鼠血清中IL-2的含量；采用TUNNEL法檢測大鼠肝臟組織中T淋巴細胞凋亡情況。其余大鼠進行生存分析。
　　結果:
　　預實驗組預實驗組中共完成40對SD→SD大鼠組合原位肝移植模型，共死亡受體大鼠27例，其中有2例死于術中麻醉意外，9例死于術中、術后出血，2例死于術后感染，2例死于膽道梗阻，4例死于血栓栓塞，3例死于靜脈及膽管套管滑脫，剩余5例死于其他原因。
　　實驗組實驗組成功完成52對Wist

4、ar→SD大鼠組合原位肝移植，結果如下：一般情況方面：空白對照組出現(xiàn)急性排斥應反表現(xiàn)較其余三組明顯為早，且在整個觀察期內全部死亡，生存率具有明顯統(tǒng)計學差異（P＜0.05），而聯(lián)合組與其他兩組之間生存率亦有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；肝功能檢測方面，聯(lián)合組中TBIL、ALT、AST含量較其余三組明顯降低，具有明顯統(tǒng)計學意義（P＜0.05），CTLA4-Ig組和IDO組中的TBIL、ALT、AST含量分別較空白對照組亦有所降低，差異具有統(tǒng)計

5、學意義（P＜0.05），但該兩組間比較無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；肝臟組織病理學改變情況：空白對照組病理結構改變最明顯，RAI評分最高，聯(lián)合組病理改變最輕微，RAI評分最低，其余兩組情況介于二者之間；血清細胞因子檢測，聯(lián)合組中IL-2含量明顯低于其他三組（P＜0.05），CTLA4-Ig組和IDO組與空白對照組比較亦明顯降低P＜0.05，但該兩組間比較無明顯統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。此外，空白對照組中肝臟組織內T淋巴細胞凋亡最少