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文檔簡介
1、目的:通過采用Kamada的“改良二袖套法”成功建立Wistar→SD大鼠組合原位肝移植模型,聯(lián)合轉染目的基因CTLA4-Ig和IDO,觀察該聯(lián)合基因誘導大鼠肝移植免疫耐受的研究并探討其相關機制。
方法:采用Kamada的“改良二袖套法”建立SD→SD(預實驗組 N=40)和Wistar→SD(實驗組 N=52)大鼠組合原位肝移植模型。將實驗鼠隨機均分成四組,每組13例,其中三組在冷缺血期經(jīng)門靜脈分別注入1ml攜帶不同目的基因
2、的質粒(1×1011/ml),空白對照組只注入1ml空白質粒(1×1011/ml),即:聯(lián)合組(pWBP-CTLA4-Ig-IDO)、CTLA4-Ig組(pWBP-CTLA4-Ig)、IDO組(pWBP-IDO)和空白對照組。術后兩周內觀察各組大鼠一般生存狀況(如精神狀態(tài)、飲食、活動量、黃疸及大小便顏色等);術后第7天每組隨機挑選3只大鼠,采集腔靜脈或門靜脈血,檢測肝功能情況;收集肝臟左外葉組織制片,觀察比較各組肝臟組織病理改變情況;采
3、用ELAST法檢測大鼠血清中IL-2的含量;采用TUNNEL法檢測大鼠肝臟組織中T淋巴細胞凋亡情況。其余大鼠進行生存分析。
結果:
預實驗組預實驗組中共完成40對SD→SD大鼠組合原位肝移植模型,共死亡受體大鼠27例,其中有2例死于術中麻醉意外,9例死于術中、術后出血,2例死于術后感染,2例死于膽道梗阻,4例死于血栓栓塞,3例死于靜脈及膽管套管滑脫,剩余5例死于其他原因。
實驗組實驗組成功完成52對Wist
4、ar→SD大鼠組合原位肝移植,結果如下:一般情況方面:空白對照組出現(xiàn)急性排斥應反表現(xiàn)較其余三組明顯為早,且在整個觀察期內全部死亡,生存率具有明顯統(tǒng)計學差異(P<0.05),而聯(lián)合組與其他兩組之間生存率亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05);肝功能檢測方面,聯(lián)合組中TBIL、ALT、AST含量較其余三組明顯降低,具有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05),CTLA4-Ig組和IDO組中的TBIL、ALT、AST含量分別較空白對照組亦有所降低,差異具有統(tǒng)計
5、學意義(P<0.05),但該兩組間比較無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05);肝臟組織病理學改變情況:空白對照組病理結構改變最明顯,RAI評分最高,聯(lián)合組病理改變最輕微,RAI評分最低,其余兩組情況介于二者之間;血清細胞因子檢測,聯(lián)合組中IL-2含量明顯低于其他三組(P<0.05),CTLA4-Ig組和IDO組與空白對照組比較亦明顯降低P<0.05,但該兩組間比較無明顯統(tǒng)計學差異(P>0.05)。此外,空白對照組中肝臟組織內T淋巴細胞凋亡最少
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