門靜脈回流大鼠胰腎聯(lián)合移植模型的建立及ICOS單抗聯(lián)合CTLA4Ig在大鼠胰腺移植中的作用研究.pdf

1、第一部分目的：建立一個(gè)穩(wěn)定、可靠、符合生理模式的胰腎聯(lián)合移植模型。 方法：以雄性健康近交系SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，予鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)50mg/kg體重一次性尾靜脈注射，建立糖尿病大鼠模型。注射后隔日測(cè)血糖及尿糖，血糖連續(xù)兩次超過(guò)16.8mmol/L且尿糖反應(yīng)強(qiáng)陽(yáng)性者判斷為糖尿病誘導(dǎo)成功，作為移植受體使用。行整塊胰腎十二指腸移植，采用供體腹主動(dòng)脈和受體腹主動(dòng)脈端側(cè)吻合，供體門靜脈和受體腸系膜靜脈端

2、側(cè)吻合，供體腎靜脈和受體腎靜脈袖套式吻合，供體十二指腸與受體空腸側(cè)側(cè)吻合，供體輸尿管膀胱瓣與受體膀胱吻合。 結(jié)果：共正式實(shí)驗(yàn)30例，以術(shù)后血糖正常且存活5天以上為標(biāo)準(zhǔn)，成功率達(dá)到80％。供體手術(shù)時(shí)間為(50.90±3.13)min,受體手術(shù)時(shí)間為(73.03±3.85)min。術(shù)前以及術(shù)后第1，3，5天的血糖分別為(18.0±0.54)、(4.76±0.12)、(5.18±0.10)、(5.69±0.12)mmol/L。

3、 結(jié)論：我們通過(guò)這種方法建立的模型是穩(wěn)定、可靠的，可用于胰腎聯(lián)合移植基礎(chǔ)方面的研究。 第二部分 目的：探討ICOS單抗、CTLA4Ig阻斷共刺激通路對(duì)于異基因大鼠胰腺移植的作用及可能機(jī)制。 方法：建立以F344大鼠為供體，LEWIS大鼠為受體的胰腺移植模型，分A組(對(duì)照組)，B組(CTLA4Ig組)，C組(抗ICOS單抗組)，D組(聯(lián)合CTLA4Ig和抗ICOS單抗組)。 CTLA4Ig于術(shù)后即刻陰莖背靜脈注入2

4、00μg，抗ICOS單抗于術(shù)后1天陰莖背靜脈注入200μg。術(shù)后1、4、7d監(jiān)測(cè)血糖，第7 d取胰腺做HE染色，取脾臟做流式細(xì)胞檢測(cè)CD3<'+>CD8<'+>T細(xì)胞、CD4<'+>T細(xì)胞、CD4<'+>CD25<'+>T細(xì)胞。 結(jié)果：與A組比較：B、C、D組排斥反應(yīng)較A組明顯減弱，顯著延長(zhǎng)了移植物的存活時(shí)間。CD3<'+>CD8<'+>T細(xì)胞計(jì)數(shù)B、C、D與A組比較均有減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。CD4<'+>T細(xì)