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1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br> 本研究通過(guò)一次性灌胃建立百草枯(Paraquat,PQ)中毒大鼠肺纖維化模型,觀察螺內(nèi)酯能否阻抑PQ中毒大鼠肺纖維化,以揭示PQ中毒致肺纖維化部分機(jī)理及初步探討其可能的干預(yù)機(jī)制。
實(shí)驗(yàn)方法:
63只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為三組:正常對(duì)照組(Control組)、百草枯染毒組(Paraquat,PQ組)、百草枯+螺內(nèi)酯治療組(Paraquat+Spironolactone,PQ+SP
2、I組)。各組大鼠按觀察時(shí)點(diǎn)7d、14d、28d隨機(jī)又分成三個(gè)亞組,每亞組7只。PQ組和PQ+SPI組大鼠于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始一次性PQ(80mg/kg)灌胃染毒而Control組給予2ml生理鹽水灌胃。灌胃后2小時(shí),PQ+SPI組大鼠每日予以螺內(nèi)酯(Spironolactone,100mg/kg)1次灌胃干預(yù),而PQ組和Control組則予以生理鹽水2ml灌胃。各組大鼠分別于造模后第7d、14d、28d處死,處死前開(kāi)胸獲取血及肺組織,記錄各時(shí)點(diǎn)各
3、組大鼠體重、肺濕重以比較體重變化及肺系數(shù)。取右肺組織進(jìn)行HE染色、Masson染色觀察形態(tài)學(xué)變化且取左肺部分組織測(cè)定羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量的變化以判定肺損傷、肺纖維化的程度;用放射免疫分析法檢測(cè)血漿及左肺剩余組織醛固酮(Aldosterone,ALD)的含量;用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)在各組大鼠肺組織中的表達(dá),并用圖像分析半定量測(cè)定TGF-β1
4、、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)的平均光密度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
(1)PQ組大鼠染毒后中毒反應(yīng)重,體重增量明顯減少,各時(shí)點(diǎn)肺泡炎、肺纖維化程度積分及肺系數(shù)、肺組織中HYP含量均較Control組明顯增高(P<0.01)。各時(shí)點(diǎn)血漿及肺組織中ALD含量均明顯高于Control組,第14d始差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺組織各時(shí)點(diǎn)TGF-β1、α-SMA蛋白表達(dá)的MOD值均高于Control組及PQ+SPI組,第14d始差
5、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。
(2)PQ+SPI組大鼠染毒后中毒表現(xiàn)較PQ組輕,體重增量也較PQ組少,各時(shí)點(diǎn)肺組織病理變化與PQ組相似,但程度有所減輕,各時(shí)點(diǎn)肺泡炎、肺纖維化程度積分均較PQ組有所減輕(P<0.05或P<0.01)。各時(shí)點(diǎn)肺系數(shù)、肺組織中HYP含量均高于Control組,但較PQ組均有所降低(P<0.01)。各時(shí)點(diǎn)血漿及肺組織中ALD水平均較同時(shí)間點(diǎn)PQ組和Control組升高,第14d始
6、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺組織各時(shí)點(diǎn)TGF-β1蛋白表達(dá)的MOD值均高于Control組,但較PQ組明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。肺組織第7d時(shí)α-SMA蛋白表達(dá)的MOD值與PQ組和Control組相比,均無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),第14d始差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
結(jié)論:
通過(guò)一次性PQ(80mg/kg)灌胃染毒可成功建立PQ中毒致肺纖維化大鼠模型,
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