人類CYP2A13基因SNPs及其與喉、咽、鼻惡性腫瘤危險(xiǎn)性的相關(guān)性研究.pdf

1、　　目的 檢測(cè)分析可能改變酶的代謝活性的人類細(xì)胞色素P450(CYP)2A13基因的單核苷酸多態(tài)性。測(cè)定CYP2A13基因的等位突變位點(diǎn)頻率并分析其意義。
　　方法 收集32例中國(guó)患者(10例喉癌和6例下咽癌,2例鼻腔腫瘤,5例鼻息肉和9例其他的頭頸部疾病患者)外周血DNA標(biāo)本,采用長(zhǎng)片段聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Long-Distance PCR)方法,根據(jù)全人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)(GenBank accession no. AC008962[G

2、enBank])中的CYP2A 13基因序列進(jìn)行設(shè)計(jì),5′端上游引物1和3′端下游引物2被用來(lái)擴(kuò)增全長(zhǎng)CYP2A 13基因。32例基因DNA樣本被擴(kuò)增為包含人類CYP2A 13基因的基因片斷,擴(kuò)增片斷9456bp,開始于ATG起始密碼前1117 bp,終止于終止密碼TGA后869 bp。所有的PCR產(chǎn)物用擴(kuò)增引物進(jìn)行排序,排序區(qū)間涵蓋ATG起始密碼前約1千個(gè)堿基對(duì)、所有的外顯子和外顯子與內(nèi)含子的連接以及TGA終止密碼后約100 bp。所

3、有的長(zhǎng)片段-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物均使用QIAquick Gel Extraction kit(QIAGEN)進(jìn)行凝膠純化然后經(jīng)自動(dòng)DNA測(cè)序儀(model 3100)進(jìn)行測(cè)序檢測(cè)。
　　結(jié)果 檢測(cè)結(jié)果共有14個(gè)突變位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn),其中4個(gè)位于編碼區(qū),而其他10個(gè)則位于非編碼區(qū)：2個(gè)位于5′側(cè)翼,2個(gè)位于3′非翻譯區(qū),6個(gè)位于內(nèi)含子。所有檢測(cè)到的不同等位基因均為雜合子。
　　檢測(cè)到的4個(gè)編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)中,位于外顯子5由3375C&g