IL-10對人mDCs生物物理學特性和運動能力的影響.pdf

1、腫瘤微環(huán)境指腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中所處的內(nèi)環(huán)境,由腫瘤細胞、間質(zhì)細胞、微血管、組織液、少量浸潤細胞及大量細胞因子等共同構(gòu)成[1]。近年來,有越來越多的證據(jù)表明腫瘤微環(huán)境在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。腫瘤細胞、免疫細胞及其他間質(zhì)細胞之間相互作用,產(chǎn)生了包括血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transformedgrowthfactor,TGF-β1)和白

2、介素-10(interleukin-10,IL-10)在內(nèi)的多種免疫抑制性細胞因子,共同營造形成腫瘤微環(huán)境[2],抑制機體的免疫系統(tǒng),促使腫瘤細胞逃逸機體的免疫監(jiān)視,最終導致腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。樹突狀細胞(dendriticcells,DCs)是目前所知的機體內(nèi)功能最強大的專職抗原呈遞細胞(antigenpresertingcell,APC)[3-5],是機體免疫應答的始動者,在抗腫瘤免疫過程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。課題組以前的研究表明:腫瘤微環(huán)

3、境來源的細胞因子能夠通過影響DCs的生物物理特性來損傷其免疫功能。但是以上結(jié)果只是研究了腫瘤微環(huán)境來源的細胞因子對DCs功能的綜合影響,而未考慮到單一的細胞因子的作用。為了更深入地理解DCs的生物學行為和腫瘤的免疫逃逸機制,本研究從生物物理學與免疫學交叉的角度出發(fā),探索IL-10對成熟DCs(maturedendriticcells,mDCs)生物物理特性和運動能力的影響。
　　本研究分別用0.01ng/ml、0.1ng/ml、1

4、ng/ml和10ng/ml的IL-10處理mDCs作為實驗組,未處理組作為對照。檢測了mDCs的細胞電泳率、滲透脆性和粘彈性、傅里葉紅外光譜、細胞凋亡、細胞周期等生物物理學指標,以及細胞骨架F-actin的形態(tài)及表達量、細胞核的形態(tài)和大小,部分細胞骨架結(jié)合蛋白的表達水平結(jié)構(gòu)、跨內(nèi)皮細胞遷移能力以及基因表達譜等。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,細胞電泳率和滲透脆性在0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml均下降(0.1ng/ml

5、和10ng/ml,P<0.05;1ng/ml,P<0.01);并且在1ng/ml時,mDCs的電泳率、滲透脆性以及細胞遷移率出現(xiàn)了最低值。在0.01ng/ml、1ng/ml時,粘彈性受到明顯抑制(P<0.01);傅里葉變換紅外光譜實驗顯示,A1020/A1545和A1030/A1080在0.01ng/ml顯著增加(P<0.05,P<0.01),A1121/A1545在0.1ng/ml顯著增加(P<0.05)。細胞骨架系統(tǒng)F-actin發(fā)

6、生重組且表達量上調(diào)(P<0.05)。在WesternBlot試驗中發(fā)現(xiàn),IL-10以一種濃度依賴的形式使細胞骨架結(jié)合蛋白fascin上調(diào)(P<0.05)、profilin-1下調(diào)(P<0.05)、去磷酸化的cofilin下調(diào)(P<0.05)、磷酸化的cofilin上調(diào)(P<0.01)。基因芯片表達譜的結(jié)果顯示,10ng/ml的IL-10使4個基因表達上調(diào),16個基因表達下調(diào),分別涉及了免疫應答、細胞凋亡、細胞骨架的結(jié)構(gòu)組成等功能。