IL-6、IL-10對EGF體外誘導人牙齦成纖維細胞上皮化的影響.pdf

1、目的:
　　 外傷、皮膚黏膜病、放射性因素以及各種生化因素等導致的上皮損傷，往往伴隨著組織的嚴重缺損，依靠自身的恢復能力難以恢復到正常的組織結(jié)構(gòu)和功能狀態(tài)，快速的創(chuàng)面再上皮化是減少創(chuàng)面感染和提高患者救治成功率的關鍵。目前組織工程為上皮缺損修復開辟了新途徑，已有研究證明大鼠骨髓MSC經(jīng)誘導后可以表達上皮特異性蛋白-角蛋白。但MSC的獲取較難。
　　 目前研究發(fā)現(xiàn):牙齦成纖維細胞自我更新能力活躍，在牙周、牙齦組織的保護和修復

2、中起重要作用。最近發(fā)現(xiàn)的牙齦間充質(zhì)干細胞具有易取材，增殖快，有成骨、成脂肪、成軟骨細胞等多向分化的能力，表明牙齦成纖維細胞中可能儲存有部分干細胞特性的細胞，因此牙齦成纖維細胞有望成為組織損傷修復的相對理想的種子細胞。
　　 為探討牙齦成纖維細胞作為組織工程的種子細胞應用于上皮損傷修復的可能性，本次實驗采用表皮細胞生長因子(EGF)誘導法誘導牙齦成纖維細胞向上皮細胞轉(zhuǎn)化，同時在條件培養(yǎng)基中加入一定濃度的IL-6、IL-10初步模擬

3、炎性環(huán)境，探討炎癥因子對牙齦成纖維細胞上皮化的影響，檢測牙齦成纖維細胞向上皮細胞轉(zhuǎn)化的潛力，以及不同炎癥環(huán)境對其轉(zhuǎn)化效率的影響，以期為將牙齦成纖維細胞引入創(chuàng)傷修復的治療提供一定的實驗支持。
　　 方法:
　　 1.組織塊法體外培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞，傳代培養(yǎng)至第4～7代，細胞免疫化學法檢測其角蛋白及波形蛋白表達。
　　 2.傳代培養(yǎng)牙齦成纖維細胞至4～7代，調(diào)整細胞密度0.5×106/L，配制條件培養(yǎng)基（含10μg

4、/L EGF、2％胎牛血清、1％雙抗的EpicM培養(yǎng)基），設置分別加入10μg/L IL-6、10μg/L IL-10的條件培養(yǎng)基，用于誘導培養(yǎng);對照組為完全培養(yǎng)基（含10％FBS、1％雙抗的α-DMEM培養(yǎng)基），誘導期為4天。細胞免疫化學法及免疫熒光染色法檢測角蛋白以及波形蛋白的表達，流式細胞儀法定量檢測角蛋白表達率。
　　 結(jié)果:
　　 1.約4天左右，細胞開始從組織塊周圍爬出，一個半月左右細胞可傳至第3代，鏡下觀察

5、細胞狀態(tài)良好，形態(tài)穩(wěn)定，均一，雜質(zhì)細胞少，細胞純度較高，滿足進一步實驗的條件。細胞免疫化學法檢測見角蛋白表達陰性波形蛋白陽性表達。
　　 2.誘導培養(yǎng)4天后，細胞免疫化學染色EGF組、EGF+IL-6組、EGF+IL-10組均可見上皮細胞標志蛋白角蛋白的陽性表達，波形蛋白表達陽性;免疫熒光染色顯示，各實驗組細胞角蛋白熒光表達陽性的同時，波形蛋白熒光表達也呈陽性，但相同曝光度下角蛋白熒光表達強度較波形蛋白強度弱，對照組角蛋白表達陰

6、性，波形蛋白表達陽性。流式細胞術檢測各組細胞角蛋白表達率分別為條件培養(yǎng)基(EGF)組72.5％、條件培養(yǎng)基+IL-6誘導組（EGF+IL-6）91.9％、條件培養(yǎng)基+IL-10誘導組(EGF+IL-10)86.3％、對照組68.9％。
　　 結(jié)論:
　　 實驗表明人牙齦成纖維細胞體外培養(yǎng)具有易取材、增殖快、形態(tài)穩(wěn)定的特點。牙齦成纖維細胞在一定濃度EGF存在下可以被誘導表達角蛋白，具有向上皮細胞轉(zhuǎn)化的潛能。炎性細胞因子IL