細(xì)胞骨架蛋白Mena和整合素α9在肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、本課題分為兩部分，涉及兩個(gè)在肝細(xì)胞癌（以下簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌）中尚未研究的基因，哺乳動(dòng)物 ENA(Mammalian enabled homolog，MENA)和整合素α9（Integrinα9，ITGA9），分別對(duì)它們?cè)诟伟┺D(zhuǎn)移中的功能和相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究。
　　第一部分、探討微絲調(diào)節(jié)蛋白Mena在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用。目前細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制的研究主要是微管及其相關(guān)蛋白，而微絲系統(tǒng)在腫瘤學(xué)領(lǐng)域的研究還處于早期階段。我們通過(guò)

2、體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察了微絲調(diào)節(jié)蛋白Mena在肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用，并對(duì)相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行了初步探索。首先，我們通過(guò)Real-time PCR與組織芯片技術(shù)檢測(cè)了MENA在肝癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)，研究結(jié)果表明，腫瘤組織芯片中Mena蛋白表達(dá)與癌栓形成、腫瘤多樣性、微血管侵襲和肝癌TNM分期正相關(guān)；通過(guò)慢病毒感染的方法得到MENA干擾肝癌細(xì)胞株，并對(duì)它們進(jìn)行了遷移、侵襲、凋亡、細(xì)胞免疫熒光等一系列細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，在細(xì)胞水平觀察MENA對(duì)肝癌侵襲

3、轉(zhuǎn)移的影響及分子機(jī)制,結(jié)果顯示MENA干擾能抑制肝癌細(xì)胞遷移和侵襲，促進(jìn)其發(fā)生失巢凋亡，促進(jìn)細(xì)胞骨架合成以及黏著斑和偽足的形成；進(jìn)一步通過(guò)Western Blotting實(shí)驗(yàn)、Pull Down實(shí)驗(yàn)和表達(dá)譜芯片技術(shù)觀察了MENA干擾肝癌細(xì)胞株在蛋白質(zhì)水平、磷酸化蛋白質(zhì)水平和mRNA水平的變化，認(rèn)為Mena對(duì)STAT3、 Erk和RhoA活性的上調(diào)及Cdc42活性的下調(diào)可以部分的解釋MENA對(duì)肝癌細(xì)胞生存、遷移及侵襲的促進(jìn)作用；最后進(jìn)行了

4、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果在裸鼠的肝原位和尾靜脈腫瘤移植模型中，MENA都表現(xiàn)出對(duì)肝癌細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移的促進(jìn)作用。由此，我們不但通過(guò)組織芯片發(fā)現(xiàn)MENA表達(dá)與肝癌轉(zhuǎn)移的指標(biāo)正相關(guān)，而且在細(xì)胞、分子以及體內(nèi)水平研究了MENA如何促進(jìn)肝癌轉(zhuǎn)移以及相關(guān)的機(jī)理，為進(jìn)一步探索MENA及微絲系統(tǒng)對(duì)肝癌轉(zhuǎn)移的影響提供了依據(jù)。
　　第二部分、主要研究整合素α9（Integrinα9，ITGA9）在肝癌發(fā)展轉(zhuǎn)移中的作用。整合素是一類(lèi)細(xì)胞表面的糖蛋白受體，該家族介

5、導(dǎo)機(jī)械信號(hào)與生化分子信號(hào)之間的轉(zhuǎn)化，與腫瘤細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的黏附和運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)，同時(shí)也對(duì)細(xì)胞骨架起調(diào)節(jié)作用。通過(guò)細(xì)胞增殖、侵襲和失巢凋亡實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)ITGA9過(guò)表達(dá)后能夠抑制肝癌細(xì)胞增殖和侵襲，促進(jìn)肝癌細(xì)胞失巢凋亡。在此基礎(chǔ)上，我們用裸鼠皮下、肝原位和尾靜脈腫瘤移植模型驗(yàn)證了ITGA9能抑制肝癌細(xì)胞成瘤和生長(zhǎng)，抑制在原發(fā)灶附近的轉(zhuǎn)移以及在遠(yuǎn)端的轉(zhuǎn)移。為了進(jìn)一步研究相關(guān)分子機(jī)制，我們通過(guò)酵母雙雜交技術(shù)篩選到與ITGA9相互作用的蛋白R(shí)