TSA處理對供體細胞骨架、周期和組蛋白乙?；挠绊?pdf

1、實驗中以第5代牛胎兒成纖維細胞作為供體核，以牛卵母細胞作為受體胞質進行研究，得到如下結果與結論： 1.用75 nmo1/L曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)分別處理供體細胞6、12和24h，通過核移植檢測克隆胚胎發(fā)育率，并應用激光共聚焦顯微鏡技術和流式細胞術檢測處理細胞和克隆囊胚組蛋白H3K18乙?；胶图毎芷凇＝Y果顯示：隨著TSA處理時間的延長，供體細胞組蛋白H3K18乙?；讲粩嘣龈?；以75nmo1/

2、LTSA處理供體細胞12h的克隆胚的囊胚發(fā)育率顯著高于未處理組(23.5％vs15.7％，p<0.05)供體細胞經TSA處理的克隆囊胚組蛋白H3K18乙?；脚c未處理組相比差異不顯著(p>0.05)。結論：TSA對核供體細胞的處理存在時間效應，75mnol/LTSA處理12h的牛胎兒成纖維細胞更易被卵母細胞重編程，顯著提高了克隆胚的體外發(fā)育能力，初步證實TSA是通過提高供體細胞組蛋白乙?；絹泶龠M供體細胞重編程。 2.以曲古

3、抑菌素A(Trichostatin A，TSA)作為去乙?；?HDAC)抑制劑。應用激光共聚焦顯微鏡技術，通過檢測卵母細胞組蛋白H3K18乙酰強度，來探討乙?；D移酶(HAT)和組蛋白去乙酰基酶(HDAC)在減數分裂Ⅰ期、Ⅱ期的活性。TSA的處理濃度為80um/L。結果顯示：組蛋白H3K18乙酰熒光強度在卵母細胞減數分裂期完全消失；在TSA存在下培養(yǎng)成熟的卵母細胞，在減數分裂期檢測到強的組蛋白H3K18乙酰化熒光強度；隨后卵母細胞移入

4、不含TSA的培養(yǎng)液里，3h后組蛋白H3K18乙酰熒光強度再次完全消失。結論：HAT在減數分裂Ⅰ、Ⅱ期無活性，HDAC在減數分裂Ⅰ、Ⅱ期有活性。 3.實驗所用的細胞為第2代牛胎兒成纖維細胞。TSA的處理濃度為75nmo1/L。細胞在含TSA的培養(yǎng)液里培養(yǎng)12h后用于分析。相差顯微鏡下對處理組細胞形態(tài)進行了觀察，TSA處理的細胞呈梭形，邊界清晰，個別細胞表面有凹陷。流式細胞儀測定了TSA處理細胞和對照組細胞的細胞周期，結果顯示，TS

5、A處理后的細胞，G0/G1期細胞所占的比例上升(60.1％vs48.6％，p<0.05)，S期和Gz/M期細胞所占的比例則相應降低，處理組和對照組細胞G0/G1期和S期比例間存在顯著差異(P<0.05)。應用免疫細胞化學方法分析了TSA處理的細胞微管蛋白表達情況，結果顯示，細胞具有良好的骨架系統(tǒng)，微管清晰，邊緣整齊。從另一側面反映了處理細胞的活性。結論：TSA處理12h的牛胎兒成纖維細胞形態(tài)和骨架清晰、完整。但使細胞周期發(fā)生顯著性變化。