TSA處理對(duì)供體細(xì)胞骨架、周期和組蛋白乙?；挠绊?pdf

1、實(shí)驗(yàn)中以第5代牛胎兒成纖維細(xì)胞作為供體核，以牛卵母細(xì)胞作為受體胞質(zhì)進(jìn)行研究，得到如下結(jié)果與結(jié)論： 1.用75 nmo1/L曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)分別處理供體細(xì)胞6、12和24h，通過(guò)核移植檢測(cè)克隆胚胎發(fā)育率，并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)處理細(xì)胞和克隆囊胚組蛋白H3K18乙?；胶图?xì)胞周期。結(jié)果顯示：隨著TSA處理時(shí)間的延長(zhǎng)，供體細(xì)胞組蛋白H3K18乙酰化水平不斷增高；以75nmo1/

2、LTSA處理供體細(xì)胞12h的克隆胚的囊胚發(fā)育率顯著高于未處理組(23.5％vs15.7％，p<0.05)供體細(xì)胞經(jīng)TSA處理的克隆囊胚組蛋白H3K18乙?；脚c未處理組相比差異不顯著(p>0.05)。結(jié)論：TSA對(duì)核供體細(xì)胞的處理存在時(shí)間效應(yīng)，75mnol/LTSA處理12h的牛胎兒成纖維細(xì)胞更易被卵母細(xì)胞重編程，顯著提高了克隆胚的體外發(fā)育能力，初步證實(shí)TSA是通過(guò)提高供體細(xì)胞組蛋白乙?；絹?lái)促進(jìn)供體細(xì)胞重編程。 2.以曲古

3、抑菌素A(Trichostatin A，TSA)作為去乙?；?HDAC)抑制劑。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)卵母細(xì)胞組蛋白H3K18乙酰強(qiáng)度，來(lái)探討乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙?；?HDAC)在減數(shù)分裂Ⅰ期、Ⅱ期的活性。TSA的處理濃度為80um/L。結(jié)果顯示：組蛋白H3K18乙酰熒光強(qiáng)度在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂期完全消失；在TSA存在下培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞，在減數(shù)分裂期檢測(cè)到強(qiáng)的組蛋白H3K18乙酰化熒光強(qiáng)度；隨后卵母細(xì)胞移入

4、不含TSA的培養(yǎng)液里，3h后組蛋白H3K18乙酰熒光強(qiáng)度再次完全消失。結(jié)論：HAT在減數(shù)分裂Ⅰ、Ⅱ期無(wú)活性，HDAC在減數(shù)分裂Ⅰ、Ⅱ期有活性。 3.實(shí)驗(yàn)所用的細(xì)胞為第2代牛胎兒成纖維細(xì)胞。TSA的處理濃度為75nmo1/L。細(xì)胞在含TSA的培養(yǎng)液里培養(yǎng)12h后用于分析。相差顯微鏡下對(duì)處理組細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行了觀察，TSA處理的細(xì)胞呈梭形，邊界清晰，個(gè)別細(xì)胞表面有凹陷。流式細(xì)胞儀測(cè)定了TSA處理細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞的細(xì)胞周期，結(jié)果顯示，TS

5、A處理后的細(xì)胞，G0/G1期細(xì)胞所占的比例上升(60.1％vs48.6％，p<0.05)，S期和Gz/M期細(xì)胞所占的比例則相應(yīng)降低，處理組和對(duì)照組細(xì)胞G0/G1期和S期比例間存在顯著差異(P<0.05)。應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法分析了TSA處理的細(xì)胞微管蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示，細(xì)胞具有良好的骨架系統(tǒng)，微管清晰，邊緣整齊。從另一側(cè)面反映了處理細(xì)胞的活性。結(jié)論：TSA處理12h的牛胎兒成纖維細(xì)胞形態(tài)和骨架清晰、完整。但使細(xì)胞周期發(fā)生顯著性變化。