TSA處理對供體細胞骨架、周期和組蛋白乙酰化的影響.pdf

1、實驗中以第5代牛胎兒成纖維細胞作為供體核，以牛卵母細胞作為受體胞質(zhì)進行研究，得到如下結(jié)果與結(jié)論： 1.用75 nmo1/L曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)分別處理供體細胞6、12和24h，通過核移植檢測克隆胚胎發(fā)育率，并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和流式細胞術(shù)檢測處理細胞和克隆囊胚組蛋白H3K18乙?；胶图毎芷凇＝Y(jié)果顯示：隨著TSA處理時間的延長，供體細胞組蛋白H3K18乙酰化水平不斷增高；以75nmo1/

2、LTSA處理供體細胞12h的克隆胚的囊胚發(fā)育率顯著高于未處理組(23.5％vs15.7％，p<0.05)供體細胞經(jīng)TSA處理的克隆囊胚組蛋白H3K18乙酰化水平與未處理組相比差異不顯著(p>0.05)。結(jié)論：TSA對核供體細胞的處理存在時間效應(yīng)，75mnol/LTSA處理12h的牛胎兒成纖維細胞更易被卵母細胞重編程，顯著提高了克隆胚的體外發(fā)育能力，初步證實TSA是通過提高供體細胞組蛋白乙?；絹泶龠M供體細胞重編程。 2.以曲古

3、抑菌素A(Trichostatin A，TSA)作為去乙?；?HDAC)抑制劑。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)，通過檢測卵母細胞組蛋白H3K18乙酰強度，來探討乙?；D(zhuǎn)移酶(HAT)和組蛋白去乙?；?HDAC)在減數(shù)分裂Ⅰ期、Ⅱ期的活性。TSA的處理濃度為80um/L。結(jié)果顯示：組蛋白H3K18乙酰熒光強度在卵母細胞減數(shù)分裂期完全消失；在TSA存在下培養(yǎng)成熟的卵母細胞，在減數(shù)分裂期檢測到強的組蛋白H3K18乙?；療晒鈴姸?；隨后卵母細胞移入

4、不含TSA的培養(yǎng)液里，3h后組蛋白H3K18乙酰熒光強度再次完全消失。結(jié)論：HAT在減數(shù)分裂Ⅰ、Ⅱ期無活性，HDAC在減數(shù)分裂Ⅰ、Ⅱ期有活性。 3.實驗所用的細胞為第2代牛胎兒成纖維細胞。TSA的處理濃度為75nmo1/L。細胞在含TSA的培養(yǎng)液里培養(yǎng)12h后用于分析。相差顯微鏡下對處理組細胞形態(tài)進行了觀察，TSA處理的細胞呈梭形，邊界清晰，個別細胞表面有凹陷。流式細胞儀測定了TSA處理細胞和對照組細胞的細胞周期，結(jié)果顯示，TS

5、A處理后的細胞，G0/G1期細胞所占的比例上升(60.1％vs48.6％，p<0.05)，S期和Gz/M期細胞所占的比例則相應(yīng)降低，處理組和對照組細胞G0/G1期和S期比例間存在顯著差異(P<0.05)。應(yīng)用免疫細胞化學(xué)方法分析了TSA處理的細胞微管蛋白表達情況，結(jié)果顯示，細胞具有良好的骨架系統(tǒng)，微管清晰，邊緣整齊。從另一側(cè)面反映了處理細胞的活性。結(jié)論：TSA處理12h的牛胎兒成纖維細胞形態(tài)和骨架清晰、完整。但使細胞周期發(fā)生顯著性變化。