白細(xì)胞介素-9在單純皰疹性角膜基質(zhì)炎小鼠角膜組織中的表達(dá).pdf

1、目的:
　　 研究小鼠單純皰疹性角膜基質(zhì)炎(HSK)發(fā)生和發(fā)展過程中白細(xì)胞介素-9(interleukin-9,IL-9)在角膜組織中的表達(dá)水平,分析IL-9與HSK的關(guān)系,為進(jìn)一步研究IL-9在HSK疾病過程發(fā)揮的作用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)組用單純皰疹病毒1型(HSV-1)接種于BALB/c小鼠角膜上建立HSK動(dòng)物模型,對(duì)照組采用DMEM液接種。顯微鏡下在各時(shí)間點(diǎn)(第1、3、5、7、8、10、14

2、、21d),觀察小鼠的角膜混濁程度。分別于角膜接種前及接種后第1、3、5、7、8、10、14、21d收集小鼠角膜。組織學(xué)檢查角膜的病理改變,實(shí)時(shí)熒光定量(Real-time)PCR的方法檢測(cè)小鼠角膜中IL-9tuRNA的表達(dá),制作小鼠角膜冰凍切片后使用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)角膜中IL-9蛋白的表達(dá)。采用配對(duì)t檢驗(yàn),Kruskal-Wills檢驗(yàn),Nemenyi法檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:

3、r>　　 1、實(shí)驗(yàn)組角膜接種病毒后第1d開始小鼠出現(xiàn)不同程度的角膜上皮層損害,于病毒接種后第7d角膜上皮損害基本痊愈,開始出現(xiàn)角膜基質(zhì)混濁,角膜基質(zhì)混濁逐漸加重,于接種后第14d時(shí)達(dá)到高峰,而后至21d角膜基質(zhì)混濁程度逐漸減輕。接種后第14d,組織病理學(xué)顯示角膜基質(zhì)層高度水腫、增厚,角膜基質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤,新生血管增生。對(duì)照組小鼠角膜未見明顯病理性改變。實(shí)驗(yàn)組接種后7、8、10、14、21d平均角膜基質(zhì)混濁評(píng)分與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)

4、差異(P＜0.05)。
　　 2、Real-timePCR數(shù)據(jù)顯示:接種HSV-1后1d小鼠角膜中IL-9mRNA明顯增加(6.37±0.45),約為接種前小鼠角膜的6.37倍,高表達(dá)持續(xù)至HSV-1接種后14d,接種HSV-1后3d小鼠角膜中IL-9mRNA表達(dá)量約為接種前小鼠角膜的5.66倍,接種HSV-1后5d小鼠角膜中IL-9mRNA表達(dá)量約為接種前小鼠角膜的3.93倍,接種HSV-1后7d小鼠角膜中IL-9mRNA表達(dá)

5、量約為接種前小鼠角膜的3.62倍,接種HSV-1后8-d小鼠角膜中IL-9mRNA表達(dá)量約為接種前小鼠角膜的3.23倍,接種HSV-1后10d小鼠角膜中IL-9mRNA表達(dá)量約為接種前小鼠角膜的2.57倍,接種HSV-1后14d小鼠角膜中IL-9mRNA.表達(dá)量約為接種前小鼠角膜的2.19倍,接種HSV-1后21d小鼠角膜中IL-9rnRNA、基本恢復(fù)至接種前水平(1.23±0.09),約為接種前小鼠角膜的1.23倍。接種HSV-1后1

6、、3、5、7、8、10、14d角膜中IL-9mRNA相對(duì)表達(dá)量與接種前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05),接種后21d角膜中IL-9mRNA相對(duì)表達(dá)量與接種前相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 3、免疫熒光技術(shù):接種HSV-1后小鼠角膜中可見IL-9蛋白的表達(dá)。IL-9蛋白表達(dá)于接種后小鼠角膜的上皮層、基質(zhì)層及內(nèi)皮層,尤其是基質(zhì)層炎性細(xì)胞上。而接種前小鼠角膜組織中未見IL-9蛋白陽性表達(dá)。
　　 結(jié)論: