白細胞介素33在角膜上皮細胞免疫炎癥反應中的作用.pdf

1、摘 要目的： ( 1 ) 探討微生物抗原通過T L R 及相關信號通路介導角膜上皮細胞I L 一3 3產(chǎn)生，并揭示工L 一3 3 在T h 2 主導的固有免疫反應中的潛在作用。( 2 ) 明確I L 一3 3 的受體S T 2 是否在角膜上皮細胞中存在并探討S T 2 的功能。( 3 ) 探討I L 一3 3 ／S T 2 信號通路在調(diào)節(jié)角膜上皮細胞產(chǎn)生炎癥因子過程中的作用。方法：( 1 ) 分別用不同的病毒或細菌成分作為T L R s

2、 的配體刺激人角膜組織或原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞，提前2 h 加入不同的抑制劑，探索不同配體誘導角膜上皮細胞產(chǎn)生I L - 3 3 的機制和具體的信號通路。( 2 ) 用外源性合成的人工L 一3 3 刺激人角膜組織或原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞，提前2 h 加入不同的抑制劑，檢測受體S T 2 在角膜上皮細胞的表達、定位以及尋找I L 一3 3 通過S T 2 及其下游的相關信號通路誘導角膜上皮細胞相關炎癥因子產(chǎn)生的機制。( 3 ) 用熒光定量

3、P C R 檢測m R N A 的表達，用酶聯(lián)免疫吸附試驗( E L I S A ) 、免疫組織化學染色、免疫熒光染色W e s t e r nb l o t t i n g 檢測蛋白水平的產(chǎn)物。結果：( 1 )分別從m R N A 水平及蛋白水平證實了T L R 3 —7 的配體都可以刺激人角膜上皮細胞產(chǎn)生工L 一3 3 ，其中T L R 3 的配體p o l y l ：C 和T L R 5 的配體f l a g e l l i n

4、是相對較強的I L - 3 3 誘導劑。( 2 ) I L 一3 3 的前體蛋白通常存在于細胞內(nèi)，被A T P 激活后就從胞內(nèi)分泌到細胞外。( 3 ) P o l y l ：C 誘導的工L 一3 3 可以被T L R 3 抗體或T R I F 抑制劑阻斷；而f l a g e l l i n誘導的I L 一3 3 可以被T L R 5 抗體或M y D 8 8 抑制劑阻斷。( 4 ) I KB —Q 抑制劑B A Y l l - 7 0

5、 8 2或者是N F —K B 激活抑制劑喹諾唑啉都可以通過阻斷N F - K B p 6 5 進而抑制P o l y l ：C或f l a g e l l i n 刺激角膜細胞產(chǎn)生的I L 一3 3 。( 5 ) 在供體人角膜組織及原代培養(yǎng)的角膜上皮細胞中均發(fā)現(xiàn)I L 一3 3 的受體S T 2 的表達。并且I L - 3 3 刺激角膜上皮后S T 2 在m R N A 及蛋白水平均有所增加。( 6 ) 外源性合成的I L - 3 3

6、 在m R N A 和蛋白水平均可以刺激角膜上皮細胞產(chǎn)生炎癥因子( T N F —Q ，I L - IB ，I L - 6 ) 和趨化因子I L 一8 ，并且這種刺激可以被S T 2 中和抗體或分泌型S T 2 阻斷。( 7 ) IKB —Q 抑制劑B A Y l l - 7 0 8 2或者是N F —KB 激活抑制劑喹諾唑啉都可以阻斷N F - K Bp 6 5 蛋白的磷酸化和核轉移，并且阻斷I L 一3 3 刺激角膜上皮細胞產(chǎn)生的炎

7、癥因子。結論：( 1 ) 微生物配體通過T L R受體介導的信號通路刺激角膜上皮細胞產(chǎn)生上皮源性的的炎癥因子I L - 3 3 ，提示角膜上皮細胞在T h 2 支配的免疫性炎癥中起重要作用。( 2 ) S T 2 表達于角膜上皮，并且工L ～3 3 ／S T 2 信號通路在調(diào)節(jié)I L 一3 3 介導的角膜上皮細胞炎癥反應過程起重要作用。博士研究生 林靜( 眼科學)指導教師 趙桂秋教授關鍵詞：白細胞介素3 3 ；S T 2 ；T o l

8、l 樣受體；免疫反應；角膜上皮c u l t u r e d H C E C s ，a n d S T 2 s i g n a l w a s e n h a n c e d b y e x p o s u r e t o I L - 3 3 ．( 6 ) I L 一3 3s i g n i f i c a n t l ys t i m u l a t e dp r o d u c t i o no f i n f l a m m a

9、t o r yc y t o k i n e s ( n 汀- 伍，I L - 1 pa n d I L - 6 )a n dc h e m o k i n eI L ·8 b yH C E C s a t b o t hm R N A a n dp r o t e i nl e v e l s ．T h e s es t i m u l a t e dp r o d u c t i o n so fi n f l a m m

10、 a t o r ym e d i a t o r s b yI L 一3 3 w e r e b l o c k e db yS T 2a n t i b o d y o rs o l u b l e S T 2 p r o t e i n ．( 7 ) I n t e r e s t i n g l y , t h e I r , B - a i n h i b i t o r B A Y 11 - 7 0 8 2 o r N F

11、一1 c Ba c t i v a t i o n i n h i b i t o rq u i n a z o l i n eb l o c k e d N F —r J 3p 6 5p r o t e i np h o s p h o r y l a t i o na n d n u c l e a rt r a n s l o c a t i o n ，a n da l s o s u p p r e s s e dt h ep

12、r o d u c t i o no f t h e s ei n f l a m m a t o r yc y t o k i n e sa n dc h e m o k i n e i n d u c e db yI L - 3 3 ．C o n c l u s i o n s ( 1 ) T h e s e f i n d i n g sd e m o n s t r a t e t h a tI L 一3 3 ，a ne p i

13、 t h e l i u m —d e r i v e d p r o —a l l e r g i c c y t o k i n e ，i s i n d u c e d b y m i c r o b i a l l i g a n d s t h r o u g hT L R —m e d i a t e d i n n a t e s i g n a l i n g p a t h w a y s ，s u g g e s t

14、 i n g ap o s s i b l e r o l e o f m u c o s a le p i t h e l i u mi n T h 2 一d o m i n a n ta l l e r g i ci n f l a m m a t i o n ．( 2 ) S T 2i sp r e s e n ti nh u m a nc o r n e a le p i t h e l i a l c e l l s ，a n

15、 d I L 一3 3 ／S T 2 s i g n a l i n g p l a y s a n i m p o r t a n tr o l e i n r e g u l a t i n g I L - 3 3i n d u c e di n f l a m m a t o r yr e s p o n s e si n o c u l a rs u r f a c e ．W em a ys p e c u l a t e ap

16、 o s s i b l e d u a le f f e c t o fS T 2 i n d i f f e r e n t t a r g e t t i s s u e s ：p r o m o t i n g a l l e r g i ci n f l a m m a t i o nt h r o u g hT h 2c e l l s w h i l e r e g u l a t i n gp r o ·i n

17、 f l a m m a t o r y r e s p o n s ei ne p i t h e l i a lc e l l s ．P o s t g r a d u a t e s t u d e n t ：J ' m g L i n ( O p h t h a l m o l o g y )D i r e c t e db y P r o f ．G u i q i u Z h a oK e y w o r d s ：I