丙戊酸對(duì)人卵巢癌A2780細(xì)胞生長(zhǎng)及血管生成和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：研究丙戊酸(VPA)對(duì)人卵巢癌A2780細(xì)胞生長(zhǎng)及血管生成和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子(VEGF、MMP-9、MMP-2、E-cadherin)表達(dá)的影響。 方法：用不同濃度(O、1、2、3、4、5 mmol/L)VPA處理體外培養(yǎng)的人卵巢癌A2780細(xì)胞24～72h，通過(guò)倒置顯微鏡和HE染色觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及細(xì)胞形態(tài)的變化。采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞OD值和生長(zhǎng)抑制率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率，免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)

2、細(xì)胞中VEGF、MMP-9、MMP-2、E-cadherin表達(dá)變化。 結(jié)果：倒置顯微鏡下和HE染色結(jié)果觀察，對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好，散在和簇狀分柿，呈圓形、多邊形、梭形，形態(tài)飽滿，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增多；實(shí)驗(yàn)組A2780細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖能力降低，呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。1 mmo/L濃度組培養(yǎng)至72h細(xì)胞數(shù)量略有減少，多數(shù)細(xì)胞體積增大，可見(jiàn)個(gè)別漂浮細(xì)胞。2 mmol/L組培養(yǎng)至72h細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯

3、減少，細(xì)胞生長(zhǎng)不良，出現(xiàn)少量漂浮細(xì)胞。3mmol/L濃度組培養(yǎng)至48h細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯減少，生長(zhǎng)不良，形態(tài)變化較為明顯，部分細(xì)胞體積變大，核漿比例減小；部分細(xì)胞體積變小、透光性減低；部分細(xì)胞胞漿凝縮、嗜酸性染色增強(qiáng)、胞核皺縮染色較深；部分細(xì)胞胞質(zhì)皺縮，嗜酸性染色增強(qiáng)，細(xì)胞核固縮凝集成均一致密的球形小體或呈新月?tīng)?，嗜堿性染色增強(qiáng)，呈現(xiàn)凋亡樣狀態(tài)；貼壁細(xì)胞減少，出現(xiàn)一定數(shù)量的漂浮細(xì)胞：隨處理時(shí)間延長(zhǎng)，上述變化更為明顯。4 mmol/L和

4、5 mmol/L濃度組培養(yǎng)至24h細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受限，細(xì)胞形態(tài)改變明顯，出現(xiàn)較多的漂浮細(xì)胞，48h漂浮細(xì)胞明顯增多，至72h 5 mmol/L組絕大多數(shù)細(xì)胞壞死漂浮，貼壁存活細(xì)胞很少。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VPA處理48h后，1、2 mmol/L濃度組的OD均值與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，3mmol/L組與對(duì)照組相比差異有顯著性(P<0.01)。>/4 mmol/L至24h OD均值與對(duì)照組相比差異有顯著性(P<0.01)

5、。各藥物濃度組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性，與倒置顯微鏡下觀察結(jié)果相一致，即相同作用時(shí)間，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制程度隨著藥物濃度的增加而加重；相同藥物濃度，隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制逐漸加重。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡率發(fā)現(xiàn)VPA作用24h后各組出現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯，細(xì)胞生長(zhǎng)被阻滯在G1期，隨著濃度增加，G1期細(xì)胞所占百分率增加，同時(shí)伴隨著S期細(xì)胞比例減少，G2期指數(shù)無(wú)明顯變化。以4mm01/L和5 mmoI/L濃度處理24h后

6、，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到亞二倍峰；48h后各實(shí)驗(yàn)組均檢測(cè)到細(xì)胞亞二倍峰，和對(duì)照組相比較凋亡率差異有顯著性(P<0.01)。細(xì)胞凋亡呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性，同一作用時(shí)間，隨著濃度增加，凋亡率隨之增高，各組之間差異有顯著性(P<0.01)；同一藥物濃度，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，凋亡率亦增加，差異有顯著性(P<0.01)。綜合上述結(jié)果，選擇3mm01/L為VPA的最佳作用濃度，48h為VPA的最佳作用時(shí)間。以此濃度和時(shí)間處理人卵巢癌A2780細(xì)胞后免疫細(xì)

7、胞化學(xué)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞VEGF、MMP-9、MMP-2表達(dá)均較對(duì)照組顯著降低(P<0.01)，E-eadherin表達(dá)較對(duì)照組增加，差異有顯著性(P<0.01)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)VEGF、MMP-9、MMP-2表達(dá)熒光指數(shù)分別為0.4391+0.01 36、0.61 87±0.0066、0.5086±0.0557，明顯少于對(duì)照組1.00±0.0193、1.00±0.013、1.00±0.0308，差異均有顯著性(P<0.01)。E-cad

8、herin表達(dá)熒光指數(shù)為1.05080±0.0008，與對(duì)照組1.00±0.0202相比，差異有顯著性(P<0.01)。 結(jié)論VPA可以有效地抑制人卵巢癌A2780細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，此作用與其抑制A2780細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，可能與其能夠下調(diào)VEGF、MMP-9、MMP-2、上調(diào)E-cadherin表達(dá)亦有關(guān)。VEGF、MMP-9、MMP-2表達(dá)下調(diào)和E-cadherin表達(dá)上調(diào)提示VPA可能具有抑制腫瘤血管