卵巢癌特異性結(jié)合肽對(duì)卵巢癌A2780細(xì)胞IKK-NF-κB通路中蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本課題前期通過(guò)體、內(nèi)外實(shí)驗(yàn)初次成功篩選并合成了卵巢癌特異性結(jié)合肽（Ovariancancer specific targeting peptide, OSTP），并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)OSTP具有促卵巢癌細(xì)胞A2780細(xì)胞凋亡及增敏紫杉醇促卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究OSTP通過(guò)IKK/NF-κB通路促卵巢癌細(xì)胞及增敏紫杉醇促卵巢癌細(xì)胞凋亡。將為OSTP用于臨床抗卵巢癌治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：1.合成O

2、STP。
　　2.體外培養(yǎng)卵巢癌 A2780細(xì)胞株，將生長(zhǎng)狀態(tài)處于對(duì)數(shù)期的卵巢癌A2780細(xì)胞株，隨機(jī)分成1640空白對(duì)照組、OSTP15min組、OSTP30min組、OSTP1h組、OSTP3h組、OSTP6h組及OSTP12h組，分別于15min、30min、1h、3h、6h及12h后提取細(xì)胞蛋白，通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)，檢查各組IKKβ、磷酸化IKKβ、NF-κB（p65）及磷酸化NF-κB（p65）的表達(dá)。

3、r>　　3.體外培養(yǎng)卵巢癌 A2780細(xì)胞株，將生長(zhǎng)狀態(tài)處于對(duì)數(shù)期的卵巢癌A2780細(xì)胞株，隨機(jī)分成1640空白對(duì)照組、DMSO對(duì)照組、紫杉醇組、OSTP組、OSTP聯(lián)合紫杉醇組，24小時(shí)后分別提取各組細(xì)胞蛋白，通過(guò)Western Blot實(shí)驗(yàn)，檢查各組IKKβ、磷酸化IKKβ、NF-κB（p65）及磷酸化NF-κB（p65）的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.成功合成 OSTP。
　　2.與對(duì)照組相比，OSTP15min組、30min

4、組、1h組、3h組、6h組、12h組中的IKKβ蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差異（p>0.05）。與對(duì)照組相比OSTP15min組、30min組、12h組中的IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；而OSTP1h組、3h組、6h組中IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表達(dá)水平升高（p<0.01），且OSTP15min組IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表達(dá)水平最低，OSTP3h組IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表達(dá)水平最高

5、。
　　3.與對(duì)照組相比，OSTP1h組、3h組、6h組、12h組中的 NF-κB（p65）蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；自O(shè)STP處理1h起，隨時(shí)間延長(zhǎng)，NF-κB（p65）蛋白表達(dá)水平逐漸減低（p<0.01）。與對(duì)照組相比 OSTP15min組、30min組、1h組、3h組、6h組、12h組中的NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；且OSTP30min組NF-κB（p65 Ser311）

6、磷酸化蛋白表達(dá)水平最低（p<0.01）。
　　4.與對(duì)照組相比，紫杉醇組中的 IKKβ蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；與對(duì)照組相比，OSTP組中的IKKβ蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著性差異（p>0.05）；與紫杉醇組相比，聯(lián)合用藥組中的 IKKβ蛋白表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。與對(duì)照組相比 OSTP組、紫杉醇組中的IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；與OSTP組、紫杉醇組相比，聯(lián)合用藥組中的IKKβ（

7、Tyr188）磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.與對(duì)照組相比，OSTP組、紫杉醇組中的NF-κB（p65）蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）。與 OSTP組、紫杉醇組相比，聯(lián)合用藥組中的 NF-κB（p65）蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對(duì)照組相比OSTP組、紫杉醇組中的NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；與 OSTP組、紫杉醇組相比

8、，聯(lián)合用藥組中的NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表達(dá)水平降低（p<0.01）；均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：1. OSTP促卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用，其機(jī)制可能與IKK/NF-κB信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白、NF-κB（p65）及NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表達(dá)降低有關(guān)。
　　2. OSTP增敏紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡作用，其機(jī)制可能與 IKK/NF-κ