丹參酮ⅡA誘導(dǎo)人卵巢癌A2780細胞凋亡的作用及機制.pdf

1、目的： 研究丹參酮ⅡA(TanⅡA)誘導(dǎo)人卵巢癌A2780細胞凋亡的作用，探討其作用機制，為TanⅡA應(yīng)用于臨床治療卵巢癌提供理論依據(jù)。 方法： MTT法檢測人卵巢癌A2780細胞經(jīng)TanⅡA藥物處理后細胞的增殖情況，計算細胞抑制率=(1—實驗組吸光度值/對照組吸光度值)×100％。實驗重復(fù)三遍，取三次結(jié)果的平均值。然后以藥物濃度為橫坐標，以細胞抑制率為縱坐標，用Excel軟件繪制出細胞生長抑制曲線，并用IC50

2、計算軟件計算出藥物作用細胞的半數(shù)抑制率(IC50)。 流式細胞儀(FCM)檢測細胞凋亡，實驗分為空白對照組(對照組)和實驗組。其中實驗組依據(jù)4.0 mg/L TanⅡ A作用于卵巢癌A2780細胞時間的長短不同，又分為24h組、48h組、72h組三個組。每個組均設(shè)3個平行樣本。細胞以1×105的濃度接種到25cm2的培養(yǎng)瓶中。收集對照組和實驗組的細胞，進行固定、染色，通過FCM檢測細胞凋亡，定量測定細胞凋亡率。 Wes

3、tern blotting法(按試劑盒說明書操作)分別檢測對照組及實驗組的細胞中Bc1-2及Bax兩種蛋白表達變化情況。 結(jié)果： 1．TanⅡ A對人卵巢癌A2780細胞的增殖具有抑制作用，其作用強度隨著藥物作用時間及濃度的增加而增強，呈時間—劑量依賴性。TanⅡA作用A2780細胞48h的半數(shù)抑制率為7.78mg/L。 2．流式細胞儀顯示，經(jīng)4.0 mg/L TanⅡA處理后，凋亡的卵巢癌A2780細胞明顯增多

4、。FCM定量顯示0，24，48，72h的凋亡率分別為4.52％，19.7％，25.3％，40.40％。隨著時間的延長，凋亡細胞增多，72h的凋亡率達到最高值，與對照組比較，24、48、72h藥物作用組凋亡率增高有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 3．Western blot檢測各組細胞Bax及Bc1-2兩種蛋白表達情況，結(jié)果表明與空白組相比，實驗組中Bax的表達均有所增加，而Bc1-2的表達則有所減少(P＜0.05)，Bc1-2/B