冠心病證型與GNB3基因和ABCA1基因多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、[目的] 通過研究，明確GNB3基因和ABCA1基因多態(tài)性與冠心病血瘀證和痰濁證的關(guān)系，為冠心病中醫(yī)證型診斷提供更可靠的指標(biāo)。 [方法] 1.文獻(xiàn)研究：系統(tǒng)研究古今文獻(xiàn)，了解冠心病證型分布特點(diǎn)及其研究進(jìn)展。 2.檢測(cè)突變位點(diǎn)策略：選取典型血瘀證22例，痰濁證23例，非痰濁血瘀證22例，健康對(duì)照組20例，根據(jù)NCBI/GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中ABCA1和GNB3序列設(shè)計(jì)了多對(duì)引物，分別擴(kuò)增檢查了轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)，使

2、用高效液相色譜分析方法，取35個(gè)標(biāo)本，選取多態(tài)性位點(diǎn)變異頻率為≥5％繼續(xù)進(jìn)行基因檢測(cè)。 3.用基因組試劑盒提取血液中DNA，運(yùn)用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)及多聚酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)(PCR-RFLP)對(duì)冠心病血瘀證、痰濁證、非痰濁血瘀證患者及健康人的GNB3和ABCA1基因型進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)血清總膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、極低密度脂蛋白膽固醇及血壓、腹圍、身高、年齡等指標(biāo)，綜

3、合分析，以探討GNB3和ABCAl基因多態(tài)性與冠心病證型的關(guān)系。 4.運(yùn)用Zung自評(píng)抑郁量表(SDS)測(cè)定抑郁程度，抑郁指數(shù)(SDS計(jì)分/80)≥0.5者為伴發(fā)抑郁，其中0.50～0.59為輕度，0.60～0.69為中度，≥0.70為重度抑郁。 [結(jié)果] 1.文獻(xiàn)研究表明：血瘀證、痰濁證是臨床最常見的中醫(yī)證型。冠心病血瘀證、痰濁證存在脂質(zhì)代謝紊亂以及基因表達(dá)異常。冠心病的發(fā)病與多種易感基因多態(tài)性有關(guān)。

4、2.冠心病患者與健康對(duì)照組在ABCA1基因型分布中差異明顯(P＜0.05或P＜0.01)，血瘀證、痰濁證冠心病患者219KK基因型明顯低于非痰濁血瘀證患者、健康對(duì)照組(P＜0.05，P＜0.01)。血瘀證、痰濁證與基因型相關(guān)性分析顯示RR基因型OR＞1。對(duì)血瘀證及痰濁證冠心病患者各基因型間脂質(zhì)水平分析結(jié)果表明，RR和RK基因型高密度脂蛋白膽固醇水平明顯低于KK基因型(P＜0.05或P＜0.01)，各證型高密度脂蛋白膽固醇水平呈現(xiàn)RR→R

5、K→KK的遞增趨勢(shì)。進(jìn)一步Logistic回歸分析顯示，RR基因型為血瘀證、痰濁證發(fā)病的危險(xiǎn)因素(95％CI不包含1)。 3.冠心病患者與健康對(duì)照組在GNB3基因型分布構(gòu)成比中差異明顯(P＜0.05)，冠心病痰濁證、血瘀證與GNB3基因825TT基因型相關(guān)，與非痰濁血瘀證患者及健康人對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05)，冠心病血瘀證、痰濁證分別與非痰濁血瘀證、健康對(duì)照組比較，其結(jié)果TT基因型OR值大于1。進(jìn)一步Logistic回歸

6、分析顯示，TT基因型為血瘀證、痰濁證發(fā)病的危險(xiǎn)因素(95％CI不包含1)。 4.對(duì)冠心病ABCA1和GNB3基因型聯(lián)合分析表明ABCAl基因R219K和GNB3基因C825T多態(tài)性在冠心病和健康人群差異有顯著性，同時(shí)具有ABCA1219RR或RK基因型和GNB3825TT或CT基因型比同時(shí)具有219KK/825CC基因型者有較高的早發(fā)CHD危險(xiǎn)。 5.冠心病抑郁發(fā)生率顯著高于健康對(duì)照組(P＜0.05)，冠心病抑郁組的GN

7、B3基因825TT基因型高于冠心病不抑郁組，差異有顯著性(P＜0.05)。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS10.0軟件及SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。組間中醫(yī)證型、基因型分布使用病例一對(duì)照的x2檢驗(yàn)；血脂指標(biāo)與證型及基因型的比較分析采用One-wayANOVA及析因設(shè)計(jì)的方差分析方法，組間多重分析用LSD、SNK比較。相關(guān)基因、危險(xiǎn)因素與CHD證型的相關(guān)性用Logistic回歸分析。 [結(jié)論] 1.冠心病與ABCA1

8、基因和GNB3基因多態(tài)性相關(guān)，ABCA1基因219KK基因型可能是冠心病痰濁證、血瘀證的保護(hù)因素，并且攜帶KK基因型的患者高密度脂蛋白膽固醇水平高。GNB3基因825TT基因型可能是冠心病血瘀證、痰濁證的易感基因。進(jìn)一步聯(lián)合基因分析表明，在冠心病患者中，ABCA1219RR基因型和GNB3825TT基因型相互有一定影響。 2.GNB3基因多態(tài)性與冠心病情志有一定的關(guān)聯(lián)，尤其是GNB3825TT基因型在冠心病抑郁情志的發(fā)生中可能起