脂肪因子Vaspin在妊娠期糖尿病中的作用.pdf

1、妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期首次出現(xiàn)或發(fā)生的糖代謝異常。以往報(bào)道發(fā)病率2～5％，GDM可以造成子癇前期、巨大兒、肩難產(chǎn)、新生兒高膽紅素血癥、RIDS等母兒并發(fā)癥，嚴(yán)重影響母嬰健康。
　　目前認(rèn)為GDM的發(fā)病機(jī)制包括:脂肪細(xì)胞功能的改變、胎盤(pán)和激素的變化、炎癥和氧化應(yīng)激。這些均與胰島素抵抗有關(guān)。而脂肪細(xì)胞因子與胰島素抵抗關(guān)系密切。絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)是一種新

2、的具有胰島素增敏作用的脂肪細(xì)胞因子，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族。近來(lái)報(bào)道其與T2DM的發(fā)生有關(guān)。但關(guān)于vaspin與GDM的關(guān)系，研究尚少。
　　本研究分別測(cè)定妊娠中、晚期GDM患者血清及臍血vaspin水平，探討其與糖、脂代謝及胰島素抵抗間關(guān)系，同時(shí)測(cè)定胎盤(pán)組織vaspin mRNA及蛋白含量，比較GDM與正常妊娠胎盤(pán)組織vaspin轉(zhuǎn)錄及蛋白水平的差異以及與新生兒體質(zhì)量間的關(guān)系，以探討vaspin在GDM發(fā)生中的作用和與胎兒

3、生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)系。本研究還通過(guò)BeWo細(xì)胞的體外培養(yǎng)，觀(guān)察IL-6、高糖等不同因子對(duì)BeWo細(xì)胞vaspin表達(dá)的影響，探討其調(diào)控機(jī)制。
　　第一部分 GDM患者妊娠中期血清Vaspin水平
　　目的:測(cè)定vaspin在妊娠中期血清中的表達(dá)，探討vaspin在妊娠期糖尿病(GDM)發(fā)病中的作用及其與胰島素抵抗的相關(guān)性。
　　方法:選擇2013年1月至2013年6月于河北省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的孕24～28周的單胎孕婦，根據(jù)

4、75g葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)結(jié)果，分為GDM組30例和正常妊娠組(NGT)28例;同期在體檢中心健康查體的糖耐量正常的健康育齡非妊娠婦女(NC)27例為正常對(duì)照組。采用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)各組婦女空腹血糖(FPG)、服糖后1h及2h血糖水平;采用放射免疫法檢測(cè)各組婦女空腹胰島素(FIN)水平并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR);檢測(cè)各組婦女的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白(LDL)水平;EL

5、ISA法測(cè)定血清vaspin、IL-6水平。
　　結(jié)果:
　　1 GDM組婦女TC、TG、HDL及LDL水平分別為（5.52±0.87）、（2.79±0.77）、（1.75±0.44）及（3.34±0.77）mmol/L，NGT組婦女分別為（5.85±0.78）、（2.52±0.71）、（1.94±0.39）及(3.4±0.62)mmol/L，兩組婦女血脂水平明顯高于正常對(duì)照組，分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

6、
　　2 GDM組空腹血糖、糖耐量1h血糖及糖耐量2h血糖[(5.48±0.69、10.87±1.84、8.55±1.76)mmol/L]均明顯高于NGT組[(4.54±0.28、7.42±1.33、6.2±0.92)mmol/L]和NC組[（5.16±0.42、7.58±0.83、6.75±0.68）mmol/L]，分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3 GDM組婦女INS水平（14.03±5.57μU/m

7、L）、HOMA-IR（3.45±1.46）明顯高于NGT組（11.49±4.18μU/mL;2.32±0.86）及NC組（8.88±3.75μU/mL;2.03±0.87），分別比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4 GDM組及NGT組婦女血清vaspin水平[分別為（5.10±2.36）、（5.43±1.88）ng/mL]顯著高于NC組（2.03±2.34ng/mL），分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);GDM

8、組婦女血清vaspin水平雖略低于NGT組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5 GDM組及NGT組婦女血清IL-6水平[分別為（296.96±122.38）、（286.80±97.66）ng/mL]均顯著高于NC組（234.38±90.86ng/mL），分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); GDM組婦女血清IL-6水平雖略高于NGT組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6 GDM組和NGT組婦女v

9、aspin水平與FPG、HOMA-IR等指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性(r分別=-0.16，-0.01，0.33，P＞0.05)。而血清vaspin水平與膽固醇（r:0.42，P:0.02;r:0.71，P＜0.01）及甘油三酯(r:0.51，P＜0.01;r:0.38，P:0.046)均呈正相關(guān)，GDM組vaspin水平與IL-6呈負(fù)相關(guān)(r:-0.47，P:0.01)。NC組血清vaspin水平與INS及HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)(r:-0.42P:0

10、.03; r:-0.41, P:0.03)。
　　7 NGT組血清IL-6水平與空腹血糖相關(guān)(r:0.52，P:0.01)。GDM組IL-6與空腹血糖（r:0.54，P＜0.01）、孕前（r:0.44，P:0.02）及當(dāng)前BMI(r:0.45，P:0.01)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、妊娠期vaspin水平較健康非妊娠婦女明顯升高，而這種升高與孕婦的血糖狀態(tài)無(wú)關(guān)，vaspin主要來(lái)自胎盤(pán)分泌。
　　2、Vaspi

11、n可能參與糖、脂代謝，與GDM的發(fā)生相關(guān)。
　　3、Vaspin可能是GDM時(shí)脂代謝指標(biāo)，并受IL-6影響。
　　第二部分 GDM患者妊娠晚期血清及臍血vaspin水平
　　目的:測(cè)定vaspin、IL-6在GDM及正常妊娠婦女妊娠晚期血清及臍血中的表達(dá)水平，探討兩者在GDM發(fā)生中的作用。
　　方法:選取河北省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科于2012年10月至2013年10月行擇期剖宮產(chǎn)終止妊娠的單胎孕婦。根據(jù)妊娠中期75g葡萄

12、糖耐量試驗(yàn)(OGTT)結(jié)果，分為GDM組30例和正常妊娠組(NGT)27例。采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血糖(FPG)，采用放射免疫法檢測(cè)各組婦女空腹胰島素(FIN)水平并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR);檢測(cè)各組婦女的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法測(cè)定血清vaspin、IL-6水平。
　　結(jié)果:
　　1、GDM組TC、TG、HDL及L

13、DL水平分別為(4.67±0.89)、(3.26±1.03)、（1.32±0.23）及(2.73±0.75)mmol/L，NGT組婦女分別為(4.93±0.79)、（2.80±0.93）、（1.40±0.26）及（2.89±0.69）mmol/L，兩組比較無(wú)明顯區(qū)別（P＞0.05）。
　　2、GDM組空腹血糖和糖化血紅蛋白分別為（4.61±0.58）mmol/L、（5.88±0.38），NGT組空腹血糖為（4.23±0.51）mm

14、ol/L，糖化血紅蛋白水平為（5.48±0.38），兩組相比GDM組明顯高于NGT組（P＜0.05，P＜0.01）。
　　3、GDM組和NGT組胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)無(wú)明顯區(qū)別(12.68±4.74 vs11.63±4.91,P=0.41;2.38±1.48 vs2.24±1.08,P=0.17)。
　　4、GDM組和NGT組產(chǎn)前及產(chǎn)后三天血清vaspin水平分別為[（0.49±0.24）、（0.83±0.27)]ng/

15、mL，和[（0.36±0.13），（0.74±0.31)]ng/ml,兩組相比妊娠晚期GDM組血清vaspin水平明顯低于NGT組(P＜0.01);產(chǎn)后三天vaspin水平均下降，但以GDM組vaspin水平下降明顯(P＜0.01);GDM組和NGT組臍血vaspin水平分別為(0.34±0.12)(0.44±0.25)]ng/mL;兩組相比無(wú)明顯區(qū)別（P＞0.05）。
　　5、GDM組和NGT組產(chǎn)前及產(chǎn)后三天血清IL-6水平分別

16、為[（358.70±169.39）、(271.21±148.91)]pg/ml和[（271.21±148.91）、(255.16±142.09)]pg/ml。兩組相比GDM組血清IL-6水平明顯升高(P=0.04);兩組產(chǎn)前與產(chǎn)后血清IL-6水平均無(wú)明顯變化。而GDM組和NGT組臍血IL-6水平分別為[（383.92±213.25）、（336.95±140.70）]pg/ml，兩組相比差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　6、相關(guān)性

17、分析表明:NGT組，血清vaspin水平與TG、LDL呈正相關(guān)(r:0.45，P:0.02; r:0.42，P:0.03)，血清IL-6水平與VLDL呈負(fù)相關(guān)(r:-0.42，P:0.03)，與FPG正相關(guān)。而在GDM組，血清IL-6水平與孕前及孕晚期體重指數(shù)呈正相關(guān)（r:0.50，P:0.01; r:0.40，P:0.03）。與血清vaspin水平水平呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、妊娠晚期GDM患者血清vaspin水平下

18、降，分娩三天后進(jìn)一步降低。提示vaspin是GDM的保護(hù)因子，并主要由胎盤(pán)分泌。
　　2、 NGT組，血清vaspin水平與甘油三酯、極低密度脂蛋白呈正相關(guān)，提示vaspin可能參與了脂代謝的調(diào)控。
　　3、妊娠晚期GDM患者血清IL-6水平升高，支持氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)參與GDM的發(fā)生這一理論。
　　4、GDM患者血清vaspin水平與IL-6水平負(fù)相關(guān)，提示兩者間具某種聯(lián)系，IL-6可能對(duì)vaspin有抑制作用。

19、r>　　第三部分 GDM患者胎盤(pán)組織中vaspin的表達(dá)
　　目的:測(cè)定vaspin、IL-6 mRNA和蛋白在孕晚期GDM及正常妊娠婦女胎盤(pán)組織中的表達(dá)水平，探討兩者在GDM發(fā)病中的作用。
　　方法:于剖宮產(chǎn)術(shù)中收集胎盤(pán)組織，GDM組、正常妊娠組(NGT)各20例。用熒光定量PCR(real-time FQ RT-PCR)檢測(cè)胎盤(pán)組織vaspin及IL-6mRNA的表達(dá)水平，免疫印跡法(Western blotting)檢

20、測(cè)胎盤(pán)組織vaspin及IL-6蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、GDM組和NGT組vaspin mRNA及蛋白表達(dá)無(wú)明顯區(qū)別（0.60±0.32vs0.68±0.32,P=0.46;0.30±0.08 vs0.39±0.26,P=0.33）。
　　2、GDM組胎盤(pán)組織IL-6 mRNA及蛋白表達(dá)明顯高于NGT組(1.35±0.67 vs0.82±0.47,P=0.01;1.23±0.25 vs0.54±0.20,

21、P＜0.01)。
　　3、相關(guān)性分析表明:胎盤(pán)組織vaspin的表達(dá)與血清vaspin無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05);GDM組，vaspinmRNA與糖化血紅蛋白呈負(fù)相關(guān)(r:-0.71，P:0.01)，而與新生兒體質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)（(r=-0.48，P=0.03;r=-0.88，P＜0.01)，與胎盤(pán)組織IL-6 mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　1、GDM孕婦胎盤(pán)組織vaspin mRNA和蛋白表達(dá)與IL-6呈

22、負(fù)相關(guān)關(guān)系。提示IL-6可能參與了vaspin的調(diào)節(jié)。
　　2、胎盤(pán)組織分泌的vaspin可能通過(guò)自分泌/旁分泌在胎盤(pán)局部發(fā)揮作用，并可能參與了GDM時(shí)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)節(jié)。
　　第四部分 IL-6對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞vaspin表達(dá)的影響
　　目的:Vaspin作為一種具有胰島素增敏作用的脂肪細(xì)胞因子，主要由內(nèi)臟脂肪組織分泌。妊娠時(shí)在胎盤(pán)表達(dá)，其調(diào)節(jié)機(jī)制不明。本研究旨在探討不同因子作用下BeWo細(xì)胞vaspin表達(dá)的變化，分析其

23、調(diào)控機(jī)制。
　　方法:分別以不同濃度的IL-6(1，5，10ng/ml)、葡萄糖(5.5，10，30mmol/L)和吡格列酮(10，100ummol/L)分別作用人絨癌滋養(yǎng)細(xì)胞株BeWo細(xì)胞12、24、48和72h。留取細(xì)胞采用RT-PCR及westemblot檢測(cè)BeWo細(xì)胞中vaspin轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1、不同濃度的IL-6(1，5，10ng/ml)作用BeWo細(xì)胞培養(yǎng)12、24、48、

24、72h后，與空白對(duì)照相比，均可抑制BeWo細(xì)胞vaspin mRNA和蛋白表達(dá)。以IL-6濃度I0ng/ml，作用48h時(shí)最明顯。而對(duì)BeWo細(xì)胞中的PPAR-γ mRNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。
　　2、以不同濃度的葡萄糖(5.5，10，30mmol/L)，分別作用BeWo細(xì)胞48小時(shí)后。均可抑制vaspin和PPAR-γ的mRNA和蛋白表達(dá)，且隨葡萄糖濃度增加，抑制效果越強(qiáng)。
　　3、以不同濃度的吡格列酮(10，100um

25、ol/L)，分別作用于BeWo細(xì)胞12h、24h、48和72小時(shí)，結(jié)果:10umol/L的吡格列酮作用BeWo細(xì)胞12h、24h均可明顯上調(diào)vaspin mRNA的表達(dá)（P＜0.05），而100umol/L的吡格列酮在48h反而略有抑制作用(P＜0.05)。10umol/L和100umol/L的吡格列酮作用BeWo細(xì)胞12h、24h均可抑制PPAR-γ mRNA的表達(dá)（P＜0.05），在48h后謝印制作用消失(P＜0.01，P＜0.05

26、)。
　　結(jié)論:IL-6、葡萄糖和吡格列酮均參與滋養(yǎng)細(xì)胞vaspin表達(dá)的調(diào)控，并呈濃度依賴(lài)性表現(xiàn)。IL-6、葡萄糖抑制vaspin表達(dá)，而吡格列酮?jiǎng)t上調(diào)vaspin的表達(dá)。IL-6對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞PPAR-γ表達(dá)無(wú)影響，IL-6可以下調(diào)vaspin表達(dá)，提示vaspin受炎癥因子作用參與GDM的發(fā)生和發(fā)展。IL-6對(duì)vaspin的影響不是通過(guò)PPAR-γ途徑。滋養(yǎng)細(xì)胞vaspin分泌受多種因素調(diào)節(jié)，可能與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān)，但其調(diào)