耐異煙肼結(jié)核桿菌快速診斷抗原的篩選和鑒定.pdf

1、在進行結(jié)核桿菌比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析時，發(fā)現(xiàn)多數(shù)菌株與結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)參考株H37Rv相比都有一個蛋白不表達，經(jīng)質(zhì)譜鑒定這一蛋白為Rv0927c。推測這一蛋白的不表達可能與結(jié)核桿菌的某一基因型別相關(guān)，為證實這一觀點本研究選取56株結(jié)核桿菌臨床分離株，采用雙向電泳、基因序列分析、Spoligotyping等方法對各分離株該基因的表達情況及菌株的基因型別進行分析。結(jié)果在檢測的56株臨床分離株中，有49株耐藥性各異的分離株在Rv0927c基因序列的第

2、141位出現(xiàn)絲氨酸密碼子的缺失，該基因上游-127位有一個點突變(G→A)存在，且在雙向電泳和Western blot分析中均未見這一蛋白表達；其余7株分離株該基因的基因序列與H37Rv一致。由Spoligotyping結(jié)果可知，存在絲氨酸密碼子缺失的49株結(jié)核桿菌均屬于北京基因型，其余在該基因位點上無突變的7株均屬于非北京基因型。表明Rv0927c基因絲氨酸密碼子的缺失與否與結(jié)核桿菌的北京基因型別相關(guān)。因此，檢測Rv0927c的14l

3、位密碼子的缺失與否或檢測這一基因的表達與否可能可以作為結(jié)核桿菌北京基因型分型的一個標(biāo)志。 除此而外，本文還對結(jié)核桿菌耐藥與藥物外排泵的關(guān)系進行了初步探討。為明確藥物外排泵基因在藥物壓力下是否過表達，本文通過應(yīng)用real-time RT-PCR的方法對在異煙肼和利福平藥物壓力下耐多藥菌株中5個藥物外排基因Rv0783c，Rvl258c，Rvl410c，Rvl819c，Rv2136c表達水平進行分析，以確定這些外排基因在藥物壓力下其