急性腦出血大鼠線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化與大黃的神經(jīng)保護(hù)作用研究.pdf

1、凋亡是腦出血周圍組織細(xì)胞死亡的主要方式。線粒體是細(xì)胞凋亡的中心。近來研究發(fā)現(xiàn)ICH血腫周圍組織線粒體呼吸功能的下降和細(xì)胞色素C的釋放。線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變和上述二者密切相關(guān)。所以探討ICH動物模型血腫周圍神經(jīng)元線粒體的超微結(jié)構(gòu)是否發(fā)生病理變化,具有重要意義。在此基礎(chǔ)上,探討大黃治療急性腦出血的內(nèi)在機(jī)制。
　　 目的:
　　 觀察ICH血腫周圍神經(jīng)元線粒體超微結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化,探討大黃治療ICH的可能作用機(jī)制。
　　

2、 方法:
　　 成年Sprague-Dawley大鼠在尾狀核注入collagellaseⅣ(0.05U/0.5uL)誘導(dǎo)ICH,假手術(shù)大鼠在相同位置注入相同劑量的生理鹽水。術(shù)后3h、6h、12h、24h、48h,大鼠過度麻醉,心臟灌注取腦。采用電鏡進(jìn)行隨機(jī)拍照,定性觀察血腫周圍組織中神經(jīng)元線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化。原位末端法(TUNEL)標(biāo)記血腫周圍的凋亡細(xì)胞。腦出血大鼠ICH后3h、6h、12h,腹腔注射大黃注射液(5ml/kg)

3、或相同劑量的生理鹽水。電鏡觀察治療組和對照組線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變,Westernblot法測定caspase-3活性,TUNEL標(biāo)記凋亡細(xì)胞,阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為評價神經(jīng)功能缺損。
　　 結(jié)果:
　　 一.ICH大鼠血腫周圍線粒體超微結(jié)構(gòu)改變,包括線粒體腫脹、嵴擴(kuò)張和基質(zhì)密度改變。腦出血后線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變在3h不明顯,6h可見典型病變,12h、24h和48h均可見線粒體形態(tài)變化。二.ICH血腫周圍組織大量TUNEL

4、陽性細(xì)胞,凋亡細(xì)胞的百分率在24h達(dá)高峰(P＜0.05)。三.大鼠腦出血后3h和6h給予大黃注射液明顯減輕線粒體超微結(jié)構(gòu)的病變,抑制casepsle-3的激活(P＜0.001),減少TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)(P＜0.05),減少阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)次數(shù)(P＜0.05);腦出血后12h給藥無效。
　　 結(jié)論:
　　 1.腦出血早期可見線粒體超微結(jié)構(gòu)的病理變化;
　　 2.血腫周圍組織細(xì)胞凋亡率在腦出血后24h達(dá)高峰;