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文檔簡介
1、DC-SIGN是樹突狀細(xì)胞的表面分子,在HIV感染的過程中起重要的作用.DC-SIGN的結(jié)構(gòu)包括胞內(nèi)段,跨膜區(qū),頸區(qū)(又稱為重復(fù)序列區(qū))和糖基識別域四個(gè)部分.國外一項(xiàng)對835例高加索人的研究認(rèn)發(fā)現(xiàn)DC-SIGN重復(fù)序列區(qū)由6-8個(gè)相同的蛋白重復(fù)序列組成,其中7個(gè)重復(fù)序列的基因型在人群中占99.52﹪,為基因型的野生型.頸區(qū)基因重復(fù)序列起穩(wěn)定DC-SIGN結(jié)構(gòu)的作用.頸區(qū)重復(fù)序列的數(shù)目的變異,會(huì)影響DC-SIGN結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,因此可能對D
2、C-SIGN的功能造成潛在的影響.國外的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)DC-SIGN純合基因7/7R在HIV感染者中較多,而7/5R.等雜合基因未在HIV感染者中出現(xiàn),認(rèn)為7/7R.純合子型基因是HIV易感型基因,而雜合子基因變異則能降低HIV感染的風(fēng)險(xiǎn).為進(jìn)一步明確DC-SIGN重復(fù)序列區(qū)變異對HIV感染的影響,我們設(shè)計(jì)DC-SIGN 特異引物,通過PCR 方法, 對119例中國HIV感染者和120例正常對照的DC-SIGN基因重復(fù)序列進(jìn)行進(jìn)行擴(kuò)增,通
3、過瓊脂糖凝膠電泳和測序,分析DC-SIGN重復(fù)序列區(qū)變異情況.我們發(fā)現(xiàn)在HIV感染者有3種基因變異,而在正常對照人群出現(xiàn)5種基因型變異.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果提示,在HIV感染者和正常人群間,DC-SIGN基因型分布無明顯差異,同時(shí)雜合型DC-SIGN也在兩組人群中分布也未見明顯差異.另外,我們對在132例德國HIV感染者調(diào)查后發(fā)現(xiàn)有9種DC-SIGN變異(包括5種DC-SIGN雜合變異).我們的研究結(jié)果顯示:與以前的報(bào)道不同,DC-SIGN雜
4、合變異可以在HIV 感染者中出現(xiàn);在中國人群,DC頸區(qū)雜合基因可能不具有降低HIV感染的風(fēng)險(xiǎn).基因的啟動(dòng)子是調(diào)控基因表達(dá)的重要調(diào)控元件,與基因的表達(dá)水平和表達(dá)效率密切相關(guān).DC-SIGN在體內(nèi)局限表達(dá)皮膚和淋巴結(jié)等組織的DCs上.DC-SIGN在體內(nèi)特異性表達(dá),與其表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制有關(guān).為研究DC-SIGN啟動(dòng)子生物活性特征,我們分離DC-SIGN基因啟動(dòng)子,然后構(gòu)建到熒光素酶報(bào)告載體中pGL3-Basic和pGL3-Enhancer中,分
5、別轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞,通過測定細(xì)胞中熒光素酶活性,來檢測DC-SIGN基因啟動(dòng)子在體外表達(dá)系統(tǒng)的活性.我們在體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DC-SIGN基因啟動(dòng)子是個(gè)弱啟動(dòng)子,在增強(qiáng)子存在的情況下,僅僅能誘導(dǎo)低水平的DC-SIGN表達(dá). DC-SIGN基因啟動(dòng)子位于DC-SIGN基因5'端的+251-+487的核酸區(qū)域中,包含NF-кB等五個(gè)核轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn).為進(jìn)一步研究DC-SIGN基因啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)特征,我們構(gòu)建了NF-кB位點(diǎn)缺失的DC-SIGN
6、基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告載體,然后分別將將該報(bào)告載體和NF-кBp50表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到THP-1細(xì)胞中,觀察NF-кB和IL-4對DC-SIGN基因啟動(dòng)子功能的影響以及IL-4與NF-кBp50間的相互影響.我們發(fā)現(xiàn),NF-кB位點(diǎn)突變能使DC-SIGN基因啟動(dòng)子活性降低大約50﹪,但是并沒有將啟動(dòng)子活性完全消除.體外表達(dá)NF-кBp50在THP-1中能誘導(dǎo)DC-SIGN的表達(dá).提示在THP-1細(xì)胞中,DC-SIGN表達(dá)和NF-кBp50表
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