利培酮和帕利哌酮在SD大鼠前額葉皮質、紋狀體和伏隔核的分布研究.pdf

1、一、目的
　　 借助微透析技術研究分別單次給予抗精神病藥物利培酮和帕利哌酮后，藥物在SD大鼠血液和大腦中央前額葉皮質(mPFC)、紋狀體(STR)和伏隔核(NAc)的分布，考察藥物在大腦的分布是否有區(qū)域特異性，探索血液和腦組織藥物濃度的相關性。
　　 二、方法
　　 1.建立同時測定透析液中利培酮和帕利哌酮濃度的方法
　　 采用在線萃取聯(lián)合HPLC-MS/MS建立同時測定大鼠血液和腦微透析液中利培酮和帕利

2、哌酮濃度的方法，并對實際透析液測定過程中可能遇到的問題（轉移損失、空白基質不足等）進行考察，尋求解決方法。
　　 2.微透析技術采集樣品
　　 2.1探針回收率的考察
　　 分別用相對回收率和相對損失率的方法考察探針對不同濃度藥物（利培酮和帕利哌酮分別進行）的體外回收率，以及體內(nèi)回收率在采樣過程中的變化情況，制定準確反映采樣狀態(tài)下體內(nèi)回收率的方案。
　　 2.2微透析采樣
　　 健康雄性SD大鼠(

3、250-300 g)在麻醉狀態(tài)下植入血液探針，腦探針借助立體定位儀分別定位于mPFC、STR或NAc。大鼠術后恢復24 h，腹腔注射給予利培酮或帕利哌酮(4 mg/kg)，每隔20 min同時收集血液和腦組織透析液，連續(xù)收集600 min。2.3樣品測定和統(tǒng)計分析
　　 采用在線萃取聯(lián)合HPLC-MS/MS同時測定SD大鼠樣品（血液和腦透析液）中利培酮和帕利哌酮的濃度。測定結果用體內(nèi)回收率進行校正后，用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)

4、計分析。
　　 三、結果
　　 1.微透析樣品中利培酮和帕利哌酮濃度的測定建立了同時測定微透析樣品中利培酮和帕利哌酮濃度的方法。進樣量30μL，所選內(nèi)標為羅格列酮（3 ng/mL）。樣品中藥物濃度低，轉移損失顯著（利培酮和帕利哌酮回收率分別為44.51％和50.62％）。分別考察甲醇、乙二醇、丙二醇、乙腈、維生素C和表面活性劑十二烷基磺酸鈉的效果，其中50％乙腈萃取效果較好（回收率分別為93.66％和95.32％）。經(jīng)驗

5、證，可以用空白林格氏液代替血液和腦透析液進行部分方法學考察。利培酮和帕利哌酮在0.05-100 ng/m L濃度范圍內(nèi)線性良好(r2＞0.996)?；厥章?、精密度和準確度經(jīng)考察合格，樣品中質量控制結果均符合要求(RSD在土15％以內(nèi))。
　　 2.微透析實驗
　　 2.1探針回收率的考察
　　 結果表明，利培酮和帕利哌酮的體外回收率不隨透析方向（透析或反透析）、藥物濃度的改變而變化;體內(nèi)回收率不隨采樣時間的延長而

6、改變。由此制定測定體內(nèi)回收率的方案為:采樣結束后用反透析法考察探針對單一濃度(腦組織濃度為25 ng/ml，血液濃度為200ng/ml)藥物的體內(nèi)回收率，每只大鼠結果用自身的體內(nèi)回收率進行校正。
　　 2.2.利培酮和帕利哌酮的腦血分布
　　 無論是血液還是腦組織中，利培酮與帕利哌酮相比，達峰時間早、峰濃度高，半衰期短。在血液中，給予利培酮后，利培酮迅速代謝為帕利哌酮，兩者均在0.5-1 h達峰。大約2h后，帕利哌酮的濃

7、度開始高于利培酮。利培酮和帕利哌酮在血液中藥-時曲線下面積(AUC)的差異沒有統(tǒng)計學意義;單次給予帕利哌酮后，血液中帕利哌酮迅速達峰(0.5 h)，AUC高于單獨給予利培酮后總有效成分（利培酮+帕利哌酮）的水平。
　　 無論給予利培酮還是帕利哌酮，腦內(nèi)藥物迅速(約0.5 h)達峰，1.5-3 h后帕利哌酮濃度開始高于利培酮。利培酮、帕利哌酮以及總有效成分的AUC由高到低順序均為:NAc≥STR≥mPFC。利培酮在伏隔核的集中分布

8、顯著（前額葉皮質和紋狀體分別P=0.042和0.027）;帕利哌酮在伏隔核和紋狀體的分布較均一，在前額葉皮質分布較少。
　　 藥物在各腦區(qū)的腦血比(B/P)結果與AUC一致。利培酮的B/P在NAc(0.37-0.43)，而在STR(0.30-0.39)和mPFC(0.23-0.31)次之;帕利哌酮在NAc(0.20-0.28)和STR(0.24-0.28)相近，在mPFC(0.15-0.18)相對較低。相比之下，利培酮的B/P高

9、于帕利哌酮（mPFC、 STR和NAc分別為1.53、1.34和1.93倍）。整個采樣過程中，利培酮B/P波動較帕利哌酮大。無論利培酮還是帕利哌酮，腦組織與血藥濃度都存在相關性(P＜0.001)。
　　 四、結論
　　 1.在所研究的mPFC、STR和NAc三個腦區(qū)中，利培酮在NAc有顯著的集中分布，而帕利哌酮在STR和NAc的分布較均一，在mPFC分布相對較少。
　　 2.與利培酮相比，帕利哌酮能夠更平穩(wěn)地從血