化療藥物篩選膀胱癌干細(xì)胞的初步研究.pdf

1、化療藥物篩選膀胱癌干細(xì)胞的初步研究Preliminaryresearchonchemotherapyagentstingbladdercancerstemcells院系：華山醫(yī)院專業(yè)：外科學(xué)（泌尿外專業(yè)臨床技能型)姓名：黎力平指導(dǎo)教師：王翔教授導(dǎo)師組成員：丁強(qiáng)教授方祖軍教授瞿連喜副教授化療藥物篩選膀胱癌干細(xì)胞的初步研究中文摘要目的：膀胱泌尿上皮癌是泌尿系統(tǒng)的最常見的腫瘤而且預(yù)后不良。目前膀胱癌的治療效果并不能令人滿意。早在1977年就有

2、學(xué)者提出了腫瘤干細(xì)胞（CSCs)的假設(shè)。該假設(shè)認(rèn)為腫瘤組織中的腫瘤干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的根源。最近十余年時(shí)間里，已經(jīng)從實(shí)驗(yàn)室成功分離鑒定了急性髓性白血病的腫瘤干細(xì)胞。雖然7至9種人類CSCs己被成功分離鑒定，但其余大部分CSCs還未被分離鑒定，包括膀胱癌腫瘤干細(xì)胞。分離腫瘤干細(xì)胞的常用方法有3種。第一種也是最常見的方法是利用干細(xì)胞表面標(biāo)志物，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞篩選；第二種是利用普通干細(xì)胞的培養(yǎng)基即無血清培養(yǎng)基的方法分選；最

3、后一種則利用側(cè)群細(xì)胞（SP)具有一定干細(xì)胞特性，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分離SP細(xì)胞作為腫瘤干細(xì)胞。但是以上3中方法因?yàn)楦髯栽蚨紵o法成功分離膀胱癌腫瘤干細(xì)胞。最近有報(bào)道使用化療藥物在動(dòng)物體內(nèi)成功分選肝細(xì)胞癌腫瘤干細(xì)胞。因此，本研究基于該研究方法嘗試?yán)没熕幬矬w外初步分選膀胱癌腫瘤干細(xì)胞，驗(yàn)證該方法的可行性。方法：使用絲裂霉素C按一定的濃度梯度持續(xù)24小時(shí)作用于膀胱泌尿上皮癌T24細(xì)胞系。使用WST8細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的

4、抑制率。獲取剩余的耐藥細(xì)胞進(jìn)行下一部分實(shí)驗(yàn)。根據(jù)抑制率實(shí)驗(yàn)的結(jié)果設(shè)計(jì)絲裂霉素C的濃度為：0.03mgml，0.5mgml2mgml并分別作為實(shí)驗(yàn)組B、C及D組。使用對(duì)照組細(xì)胞作為A組。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞的細(xì)胞周期。使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及免疫印跡法分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞中OCT4及NAN0G的表達(dá)。結(jié)果：細(xì)胞抑制率實(shí)驗(yàn)顯示抑制率有濃度依賴性，隨絲裂霉素C濃度的上升呈遞增的趨勢(shì)。最大及最小抑制率分別為92.5%1.0

5、及64.1%1.4P0.001)。在最高藥物濃度的作用下只有7.5%的細(xì)胞存活。流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期檢測(cè)顯示對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組D組中分別有24.00%及83.99%細(xì)胞位于G。G期，15.33%及63.24%的細(xì)胞位于S期（^0.05)。相對(duì)于對(duì)照組，在實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞中兩種重要的干細(xì)胞標(biāo)志物OCT4及NAN0G在蛋白及基因水平明顯增高，并與絲裂霉素C的作用濃度呈濃度梯度。結(jié)論：使用絲裂霉素C作用24小時(shí)后，剩余的膀胱泌尿上皮癌細(xì)胞呈現(xiàn)出干細(xì)胞的