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文檔簡介
1、目的:研究CD154在膀胱移行細胞癌(TCC)中的表達及其與腫瘤臨床分期和病理分級之間的關(guān)系,并通過體外細胞培養(yǎng)以及小鼠膀胱腫瘤模型研究CD154的表達對膀胱TCC成瘤性的影響.方法:1.收集臨床病理標本,應(yīng)用免疫組化SP法檢測CD154在10例正常膀胱上皮和56例膀胱TCC中的表達,分析其表達強弱與臨床分期和病理分級之間的相關(guān)性.2.分離小鼠脾臟淋巴細胞,以植物血凝素刺激CD154的表達,提取CD154 mRNA,RT-PCR擴增CD
2、154 cDNA,經(jīng)HindШ和Xho Ⅰ雙酶切后連接于pcDNA3.1/Zeo(+)質(zhì)粒,構(gòu)建小鼠CD154真核表達質(zhì)粒.以陽離子脂質(zhì)體jetPEI介導(dǎo)該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠膀胱TCC細胞系BTT739細胞,經(jīng)Zeocin篩選出穩(wěn)定表達CD154的細胞株BTT739-CD154,采用同樣方法篩選pcDNA3.1/Zeo(+)空質(zhì)粒穩(wěn)定表達細胞株BTT739-pcDNA3.1/Zeo(+).3.體外培養(yǎng)BTT739細胞、BTT739-CD154
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