血小板CD154對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞TF、TFPI表達(dá)的影響.pdf

1、目的：采用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs)與人血小板共孵育的方法從多方面(分子水平、蛋白水平)來(lái)探討內(nèi)皮細(xì)胞CD40-血小板CD154信號(hào)途徑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)組織因子(tissue factor,TF)和其抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)的影響。 方法：從正常人外周血中通過(guò)密度梯度離心的方法分離血小板，用

2、ADP誘導(dǎo)血小板活化，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)血小板活化前后CD154表達(dá)的變化。同時(shí)將靜息或ADP誘導(dǎo)活化的血小板分別作用于培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，以未經(jīng)刺激的HUVECs作為陰性對(duì)照，LPS(5μg/ml)刺激的HUVECs作為陽(yáng)性對(duì)照。采用RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)(FCM)等方法檢測(cè)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TF和TFPI的表達(dá)。另外，為了驗(yàn)證血小板CD154-內(nèi)皮細(xì)胞CD40之間的相互作用對(duì)TF和TFPI表達(dá)的影響，本實(shí)驗(yàn)分別在血小板與

3、內(nèi)皮細(xì)胞共同培養(yǎng)前加入CD154單抗或者CD40單抗以阻斷活化血小板CD154或內(nèi)皮細(xì)胞CD40的作用。所有的數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進(jìn)行分析。 結(jié)果：①血小板與ADP作用后，血小板表面CD154的表達(dá)明顯升高，同對(duì)照組相比差異有顯著性(t=11.1，P<0.01)。②經(jīng)ADP活化的血小板與HUVECs共孵育后，HUVECs表達(dá)TF mRNA(t=32.3，P<0.01)以及膜表面蛋白都顯著增高(t=13.76，P<0.01)；

4、而且特異性CD40(F=124.415,P<0.01)或CD154(F=144.134,P<0.01)單克隆抗體能部分阻斷上述作用，其分別和活化血小板組以及陰性對(duì)照組比較，三者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；靜息血小板(t=2.27,P=0.08)或單純ADP(t=0.23,P=0.83)對(duì)HUVECs表達(dá)TF沒(méi)有影響。③不同狀態(tài)血小板和應(yīng)用CD40或CD154單克隆抗體以及單純ADP均不影響HUVECs TFPI的表達(dá)(F=1.36,P=0.295

5、)。 結(jié)論：①體外誘導(dǎo)血小板活化可使其表面表達(dá)CD154，靜息血小板表達(dá)極低，因此CD154可作為血小板活化標(biāo)志物之一。②活化血小板通過(guò)CD40-CD154信號(hào)通路可誘導(dǎo)HUVECs表達(dá)TF，而且，該效應(yīng)能被CD40或CD154單克隆抗體部分抑制。③血小板CD154-內(nèi)皮細(xì)胞CD40信號(hào)途經(jīng)TFPI的表達(dá)無(wú)影響。由此推測(cè)活化血小板可能通過(guò)自身表達(dá)的CD154與內(nèi)皮細(xì)胞CD40相互作用介導(dǎo)外源性凝血途徑激活，從而參與動(dòng)脈粥樣硬化斑