Nogo-A受體拮抗劑在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷中軸突再生的作用研究.pdf

1、目的：新生兒缺氧缺血性腦病是大多源于圍產(chǎn)期胎兒宮內(nèi)缺氧，是引起腦性癱瘓、智力落后、癲癇的主要原因之一，嚴(yán)重威脅新生兒生命健康，目前尚無特別有效的治療手段。目前認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）軸突再生的主要障礙之一是存在抑制再生的蛋白，迄今，人們發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)軸突再生抑制因子包括可溶性髓磷脂相關(guān)糖蛋白（myelin-associated glycoprotein，MAG）、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓磷脂糖蛋白（oligodendrocyte myelin gl

2、ycoprotein，OMgp）和Nogo蛋白三種。Chen和Prinjha以及Grandpre的課題組在2000年成功地克隆了Nogo基因，Nogo有三種同源異構(gòu)體：Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C。其中Nogo-A主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并因在體外培養(yǎng)時(shí)具有很強(qiáng)的軸突生長抑制作用而倍受關(guān)注。最近的研究又證實(shí)，這三個(gè)不同的抑制成分可能主要通過與一個(gè)共同的受體Nogo-66受體（NgR）結(jié)合而發(fā)揮作用。NEP1-40是針對Nog

3、o-66氨基酸序列的結(jié)構(gòu)區(qū)設(shè)計(jì)的NgR競爭性拮抗劑，能阻斷中樞神經(jīng)抑制因子與NgR的結(jié)合發(fā)揮作用。 本研究采用免疫組化方法檢測受試大鼠大腦Nogo-A蛋白的表達(dá)；電鏡下觀察各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞生長情況；HE染色觀察腦組織病理變化；給予Nogo受體拮抗劑及神經(jīng)節(jié)甘脂（GM-1），觀察不同時(shí)段各組受試大鼠腦組織Nogo-A陽性細(xì)胞的表達(dá)情況及神經(jīng)細(xì)胞生長情況，探討Nogo-A在新生大鼠HIBD中的作用，觀察NEP1-40與GM-1對大鼠

4、Nogo-A表達(dá)的影響及對神經(jīng)損傷后的保護(hù)作用，為進(jìn)一步研究新生兒缺氧缺血性腦病有效治療方式提供動物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將128只7日齡新生大鼠隨機(jī)分為對照組、缺氧缺血性腦損傷（HIBD）模型組、NEP1-40治療組及GM-1治療組。以上各組均在6h、24h、72h、7d四時(shí)間點(diǎn)采集標(biāo)本，每組8只。HIBD組及治療組參照Rice法制備標(biāo)準(zhǔn)HIBD模型，治療組分別于造模后即刻腹腔注射NEP1-4012．5μg/d， GM-110 m

5、g/（kg．d），視分組情況連用3天或7天。空白對照組與模型組腹腔注射生理鹽水0．25 ml/kg。各組動物分別處理后于6h、24h、72h、7d四時(shí)間點(diǎn)斷頸處死。將腦組織標(biāo)本固定于30％蔗糖、4％多聚甲醛溶液中靜置72h，石蠟固定，切片，HE染色觀察各組大鼠腦組織病理變化；用免疫組化的方法觀察Nogo-A陽性細(xì)胞數(shù)目：透射電鏡觀測其腦神經(jīng)元與軸突的變化。 結(jié)果：①對照組4個(gè)時(shí)段的新生大鼠腦組織Nogo-A陽性細(xì)胞數(shù)均隨著日齡的

6、增長而略有增加，但各時(shí)間段比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②HIBD組：Nogo-A陽性細(xì)胞在造模早期即明顯上升呈逐漸升高趨勢。③NEP1-40組：NEP1-40治療組能抑制HIBD后Nogo-A的表達(dá)，與同時(shí)段模型組對比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④GM-1組：Nogo-A的陽性細(xì)胞數(shù)早期升高，至24h時(shí)達(dá)高峰，然后開始下降，其抑制HIBD后Nogo-A表達(dá)的作用發(fā)生較遲后。 透射電鏡①HIBD組：神經(jīng)元形態(tài)不規(guī)則，線粒體腫脹、空泡變性，可見多量凋亡

7、小體。軸突溶解或嚴(yán)重破裂。②NEP1-40組：6h神經(jīng)元形態(tài)不規(guī)則，核邊聚，軸突溶解。24h胞體腫脹明顯，核形規(guī)則，核仁可見，核質(zhì)有溶解，可見較多凋亡小體，無再生現(xiàn)象；72 h及7天時(shí)腦組織結(jié)構(gòu)已明顯恢復(fù)。③GM-1組：6h、24h HIBD損傷改變不明顯；7天時(shí)神經(jīng)元腫脹漸消失，膠質(zhì)細(xì)胞呈反應(yīng)性增生，軸突再生不明顯。 結(jié)論： Nogo-A在缺氧缺血性腦損傷后早期即表達(dá)增高，并呈遞增趨勢；Nogo-A可抑制中樞神經(jīng)損傷后的再生，