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1、目的:觀察國產(chǎn)重組人血管內(nèi)皮抑素(恩度)單藥以及恩度與順鉑(CDDP)聯(lián)合時對于原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)的體外抗管腔形成作用和對雞胚尿囊膜(CAM)的體內(nèi)抗血管生成作用,并對其機制進行初步探討。 方法:采用MTS/PMS系統(tǒng),測定不同濃度的恩度以及恩度與順鉑聯(lián)合時對HUVECs和人肝癌細胞系HepG2的生長抑制作用;通過流式細胞術(shù),檢測恩度在相同時間內(nèi)誘導(dǎo)HUVECs和細胞系HepG2早期凋亡和晚期凋亡情況;體外的遷
2、移/侵襲實驗,觀察恩度對HUVECs遷移能力的影響;通過體外管腔形成實驗、鼠動脈環(huán)實驗和雞胚尿囊膜實驗,觀察恩度和順鉑以及二者聯(lián)合對HUVECs體外管腔形成和體內(nèi)血管的產(chǎn)生及功能的影響。 結(jié)果:在50ng/ml~500ng/ml的劑量范圍內(nèi),恩度持續(xù)作用72h,對HUVECs具有抑制增殖作用,細胞增殖率在95.3%~70.7%之間,即細胞增殖抑制率為4.7%~29.3%;在50ng/ml~200ng/ml內(nèi)呈現(xiàn)出典型的濃度依賴關(guān)
3、系,且隨著劑量的增大,細胞增殖率逐漸降低,抑制作用逐漸增強;但到達200ng/ml劑量水平后,抑制作用趨于穩(wěn)定。應(yīng)用臺盼藍拒染法檢測存活細胞顯示恩度對HUVECs未見明顯的細胞毒性。相同條件下,恩度對人肝癌細胞系HepG2未見明顯作用。相同濃度的作用下,經(jīng)過恩度預(yù)處理1h實驗組中HUVECs的晚期凋亡率為16.2%±4.79%,而未預(yù)處理組為4.52%±3.20%(p<0.05)。恩度與順鉑聯(lián)合時,在體外對HUVECs的抗增殖、誘導(dǎo)凋亡
4、、抑制管腔的形成具有協(xié)同/增效作用。遷移/侵襲實驗顯示隨著藥物處理方式的不同,恩度對HUVECs遷移/侵襲作用具有顯著差異。恩度和順鉑聯(lián)合時對雞胚尿囊膜的血管產(chǎn)生、面積以及血管的成熟均具有顯著影響(預(yù)期值:16.27,平均血管數(shù);實測值:15.38,平均血管數(shù)),與對照組或各單藥組比較均顯示出協(xié)同作用;而恩度單藥對鼠動脈環(huán)微細血管的產(chǎn)生未見明顯的影響。 結(jié)論:新型重組人血管內(nèi)皮抑素(恩度)能夠抑制原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC
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