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文檔簡介
1、目的:胃癌是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤,其發(fā)病率位居所有惡性腫瘤的第2位。手術是胃癌的首選治療方法,但大部分患者就診時已失去了手術的機會,即使手術后的患者局部復發(fā)率仍高達80%,因此對于無法手術切除的胃癌或轉(zhuǎn)移性胃癌,化療已經(jīng)成為常規(guī)治療。目前晚期胃癌的化療仍然缺乏一致公認的“金標準”方案,臨床常用的治療方案效果仍不令人滿意。大量研究證明腫瘤的生長依賴血管的形成,基于此理論,抗腫瘤血管治療成為一種新的治療方法,其與傳統(tǒng)藥物相比具有低毒,
2、抗瘤譜廣,不易產(chǎn)生耐藥等優(yōu)點。內(nèi)皮抑素是目前發(fā)現(xiàn)的作用最強的血管內(nèi)皮細胞增殖抑制因子,體外實驗證明能特異的抑制內(nèi)皮細胞的增殖,而對腫瘤細胞的生長無抑制作用。在臨床前腫瘤模型中,能夠抑制多種腫瘤的生長,并降低腫瘤的血管生成。
研究表明,單獨應用抗血管治療進展期腫瘤作用有限。近來化療聯(lián)合抗血管治療受到人們的廣泛關注,內(nèi)皮抑素聯(lián)合化療治療乳腺癌、肝癌、肺癌等腫瘤模型取得了較好的效果。我國學者自主創(chuàng)新研發(fā)的新型重組人血管內(nèi)皮抑素(
3、Endostar,恩度),2005年被我國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準聯(lián)合NP方案治療非小細胞肺癌。奧沙利鉑(Oxaliplatin,L-OHP)為第三代鉑類化合物,其作用機制主要是使腫瘤細胞內(nèi)DNA形成鏈間和鏈內(nèi)交聯(lián),從而中斷DNA合成,最終產(chǎn)生細胞毒和抗腫瘤活性。臨床主要用于治療大腸癌、胃癌、食管癌、卵巢癌等多種腫瘤。
本實驗通過建立小鼠胃癌模型,研究重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合奧沙利鉑對小鼠胃癌的殺傷效應及作用機制,為臨床應
4、用提供實驗依據(jù)。
方法:通過在小鼠右腋皮下接種2×106個MFC前胃癌細胞,將40只健康的C57小鼠建立小鼠前胃癌腫瘤動物模型。將40只荷瘤小鼠隨機分成4組,對照組、恩度組、奧沙利鉑組、聯(lián)合組,每組均為10只,對照組,腹腔注射等量生理鹽水;恩度組,腹腔注射恩度,0.8mg/kg,d1-14;奧沙利鉑組,腹腔注射奧沙利鉑,5mg/kg,d1;聯(lián)合組,腹腔注射恩度和奧沙利鉑,劑量同上。每天觀察小鼠的一般情況,每三天測量腫瘤體積
5、;一周后處死動物,測量原位腫瘤的重量、體積,計算抑瘤率,繪制腫瘤生長曲線;應用流式細胞儀測定細胞凋亡率;應用免疫組織化學染色測定凋亡蛋白Bax、Bcl-2及腫瘤微血管密度(MVD)的表達。所有計量資料的數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示(()±s),應用SAS9.0統(tǒng)計軟件分析,進行方差齊性檢驗后采用單因素方差分析(SNK-q)檢驗,按P<0.05的標準認為其有統(tǒng)計學意義。
結果:
1.各組小鼠的腫瘤重量及抑瘤率:各組
6、小鼠的腫瘤重量分別為:1.778±0.119g,0.822±0.107g,0.506±0.097g,0.30±0.066g,各組間比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),抑瘤率分別為53.77%,71.54%,83.13%。
2.各組小鼠的腫瘤體積:對照組腫瘤體積逐漸增大,22天時體積為1211.15±70.71mm3,治療各組小鼠腫瘤明顯較對照組生長緩慢。恩度組腫瘤生長不明顯,22天時體積為293.02±53.49mm3。奧
7、沙利鉑組腫瘤體積10天左右開始下降,聯(lián)合組腫瘤體積1周左右開始下降,22天時體積分別為141.72±44.92mm3、63.90±35.28mm3,聯(lián)合組腫瘤體積下降最明顯,各組比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
3.腫瘤細胞凋亡率:各組凋亡率分別為17.38±1.58%、26.79±3.12%、29.61±3.09%、37.92±2.78%,與對照組相比各用藥組凋亡率明顯增加(P<0.05),聯(lián)合組凋亡率高于恩度組和奧
8、沙利鉑組(P<0.05)。
4.各組腫瘤組織凋亡蛋白的表達情況:各組Bcl-2蛋白表達率分別為57.60±6.11%、31.00±5.35%、20.10±3.67%、3.41±3.0%。各組比較均有顯著性差異(P<0.05),各組Bax蛋白表達率分別為19.2±4.18%、21.1±4.23%、41.7±7.65%、45.9±7.91%,對照組與恩度組相比無顯著差異性(P>0.05),奧沙利鉑組與聯(lián)合組相比較無顯著差異性(
9、P>0.05),奧沙利鉑組、聯(lián)合組與對照組、恩度組相比較有顯著性差異(P<0.05)。
5.各組腫瘤血管生成的情況:各組MVD分別為4.11±0.86、2.29±0.63、3.38±0.91、1.60±0.61,恩度組與對照組有顯著性差異(P<0.05),聯(lián)合組與恩度組、奧沙利鉑組有顯著性差異(P<0.05)。
結論:
1.重組人血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合奧沙利鉑能夠明顯抑制小鼠胃癌移植瘤的生長。
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