低劑量順鉑節(jié)律化療抗血管生成作用的實驗研究.pdf

1、目的:低劑量順鉑節(jié)律(low-dose metrononuc，LDM)化療抗血管生成作用的體內(nèi)外實驗研究。 方法:①采用MTT法檢測低劑量順鉑節(jié)律化療對人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVECs、人肝癌細胞株HepG2增殖的影響，確定低劑量順鉑在非細胞毒濃度下抑制血管內(nèi)皮細胞生長的劑量范圍。②以接種H22肝癌細胞的昆明小鼠為動物模型，應(yīng)用不同濃度的順鉑不同頻率給予腹腔化療(節(jié)律組：順鉑0.6mg/(kg.d)每日腹腔注入，每周連續(xù)5次：最大耐

2、受劑量組：順鉑9mg/(kg.d)1次腹腔注入），在小鼠處死后完整剝離皮下瘤結(jié)節(jié)，采用免疫組化法檢測表皮生長因子受體(EGFR)的表達③采用雞胚絨毛尿囊膜(CAM)模型，觀察低劑量順鉑持續(xù)作用對雞胚絨毛尿囊膜新生血管的抑制作用：雞胚隨機分為5組，每組12只。將不同濃度順鉑分別加到孵化9天的CAM上，繼續(xù)孵化3天，在解剖顯微鏡下觀察并計算用藥后血管密度。 結(jié)果:①低劑量順鉑在非細胞毒濃度下(0.3~1.2μ g/ml)持續(xù)作用24

3、、48、72h，能有效抑制HUVECs的增殖，且在0.3~1.2μ g/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量和時間依賴性，低劑量順鉑組的吸光度值明顯低于對照組，差異有顯著性(F=14.00~206.80，q=2.18~39.63，P<0.05)。相同條件下，低劑量順鉑在此劑量范圍內(nèi)對人肝癌細胞株HepG2則未顯示出明顯抑制作用，順鉑0.3~1.2μ g/ml各組間吸光度值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.51~0.79，q=0.47~1.54，P>0.05)

4、。當(dāng)順鉑濃度達到2.4μ g/ml時，對HepG2的抑制率明顯增高，其吸光度值與其余各組比較差異有顯著性( F=38.84~90.04，q=11.24~19.62，P<0.05)。②免疫組化結(jié)果示：肝癌中EGFR有較高表達，經(jīng)順鉑作用后表達下降，其中順鉑節(jié)律組EGFR表達最低，最大耐受劑量組EGFR表達居中，與對照組比較差異有顯著性(F=140.67，q=4.17~22.31，P<0.05)。③低劑量順鉑持續(xù)作用對雞胚尿囊膜的血管發(fā)生具

5、有顯著影響：低劑量順鉑實驗組中新生血管的生成明顯減少，載體周圍血管網(wǎng)模糊，管徑不均勻且連續(xù)性中斷。低劑量順鉑各組CAM微血管數(shù)目明顯少于生理鹽水組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=184.44，q=3.18~36.37，P<0.05)。隨著順鉑濃度的增大，對CAM血管的抑制作用更加顯著，呈明顯的濃度依賴關(guān)系，順鉑0.3~2.4μ g/ml范圍內(nèi)血管抑制率達30.87~60.61％。 結(jié)論:低劑量順鉑節(jié)律化療在體內(nèi)外具有一定抗血管生成作用