肺痹湯對大鼠肺間質(zhì)纖維化干預作用的實驗研究.pdf

1、本研究探討了肺痹湯治療肺間質(zhì)纖維化的理論依據(jù)及其對博萊霉素誘導肺間質(zhì)纖維化大鼠的影響。 此次實驗在文獻回顧和導師經(jīng)驗總結(jié)的基礎(chǔ)上進行了理論研究，認為氣虛血瘀，痰熱互結(jié)，痹阻肺絡(luò)是本病的主要發(fā)病機制。針對肺間質(zhì)纖維化的病因病機，明確了肺間質(zhì)纖維化的辨證思路。在臨床上制定了益氣活血、清熱化痰、通絡(luò)開痹的治療大法。由于此法針對性強且標本兼治在臨床收到滿意療效。 實驗研究通過對博萊霉素誘導的7天、14天、28天不同病程的肺間質(zhì)纖

2、維化大鼠體重、細胞外基質(zhì)、細胞因子、形態(tài)學以及分子生物等不同指標的觀察，探討肺痹湯抗肺間質(zhì)纖維化可能的作用機制。實驗研究采用國際上公認博萊霉素誘發(fā)肺纖維化的方法制作肺間質(zhì)纖維化的模型，選用健康的成年SD大鼠180只，清潔級，體重200-250g。在1.5％戊巴比妥鈉(2.5ml·kg<'-1>)腹腔注射麻醉條件下，局部消毒后切開大鼠頸部皮膚，采用鈍性剝離暴露氣管，在肉眼直視下用注射器將博萊霉素A<,5>緩慢注入大鼠氣管內(nèi)，隨后分層縫合并

3、局部消毒。雄性SD大鼠180只，體重200±10g，隨機分為博萊霉素(BLM)組(30只)、假手術(shù)組(30只)、中藥大、中、小劑量組(90只)、陽性藥物組(30只)。選用在臨床中療效較好的肺痹湯，根據(jù)人與動物劑量進行等效換算。并根據(jù)藥物濃度的不同分為大、中、小3個劑量組，小劑量：中劑量：大劑量=1∶2∶4，中藥小劑量組給藥量為5ml/kg，中藥中劑量組給予10ml/kg，中藥大劑量組20ml/kg，每周灌胃6天。陽性藥物組選用臨床常規(guī)用

4、藥強的松，灌胃給予3.5mg/kg，加水稀釋為含生藥0.35mg/ml，每周灌胃6天。假手術(shù)組及模型組均給予生理鹽水2ml灌胃，肺間質(zhì)纖維化造模成功后第1天各治療組即開始給藥。6組動物同步于實驗開始后的第7、14、28天分別隨機處死10只。用1.5％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(2.5ml·kg<'-1>)后將大鼠固定，腹主動脈取血，分離血清，同時取出肺臟；觀察并記錄大鼠的體重；采用放免法檢測血清中透明質(zhì)酸、Ⅲ型膠原及白介素-6的含量。采用右

5、肺組織進行病理檢測，行HE染色比較肺泡炎及肺纖維化程度。左肺采用免疫組化法檢測肺組織中TGF-β1表達；左肺組織勻漿后，采用免疫印跡雜交法(western blot)檢測大鼠肺組織中p38分裂原激活蛋白酶(p38MAPK)表達。 研究結(jié)果顯示：在各個時間點，肺痹湯各劑量組較模型組可以抑制P38MAPK磷酸化活性和下調(diào)Ⅲ型膠原透明質(zhì)酸和IL-6細胞因子含量，改善肺泡炎及肺纖維化的程度，降低TGF-β<,1>在肺組織中的表達。其中7

6、d、14d、28d時肺痹湯中劑量的降低作用較為顯著，并與大、小劑量組比較具有差異性。說明肺痹湯能顯著抑制肺間質(zhì)纖維化大鼠基質(zhì)重建的作用。 本課題的創(chuàng)新之處在于用實驗研究的方法探討了肺痹湯對肺間質(zhì)纖維化干預的作用。肺痹湯治療肺間質(zhì)纖維化是通過干預P38MAPK轉(zhuǎn)導通路，抑制P38MAPK磷酸化活性和下調(diào)Ⅲ型膠原透明質(zhì)酸和IL-6細胞因子含量，降低TGF-β<,1>在肺組織中的表達等作用實現(xiàn)的。同時，以上的創(chuàng)新也為對肺間質(zhì)纖維化的進