糖尿病小鼠胰島移植的實驗研究.pdf

1、第一部分實驗性鏈脲佐菌素小鼠糖尿病模型的研究 目的研究小劑量多次注射STZ(MLDS)誘導(dǎo)遲發(fā)型1型糖尿病小鼠模型的建立。方法健康C57小鼠，雌、雄各半，隨機分為兩組，對照組(n=20)和模型組(n=40)，模型組每日給予腹腔注射6mg／mlSTZ溶液，60mg／kg，連續(xù)5d；對照組給等量枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射，連續(xù)5d，注射后隔天測量小鼠尾靜脈血糖。每周用電子天平對小鼠體重進(jìn)行稱量，汜錄稱量結(jié)果，監(jiān)測造模前后體重變化情況。造

2、模l周后處死小鼠，取出胰腺，對胰島進(jìn)行病理分析。結(jié)果模型組空腹血糖水平(17．15±3．28mmol／L)明顯高于對照組(3．52±1．43)mmM／L(P

3、化。結(jié)論小劑量多次注射STZ誘導(dǎo)糖尿病模型可有效模擬糖尿病病程及發(fā)病機理，是較理想的進(jìn)行遲發(fā)性糖尿病發(fā)病機理研究的動物模型。 第二部分小鼠胰島分離與純化的實驗研究 目的探討如何分離得到純度較高的胰島，并將其應(yīng)用于移植研究。方法健康C57小鼠，雌、雄各半，膠原酶胰管逆行灌注消化小鼠胰腺，以密度梯度離心方法和濾網(wǎng)法進(jìn)行純化，并對這兩種不同方法所獲得的胰島在糖溶液刺激后，胰島細(xì)胞釋放的胰島素水平進(jìn)行對比。結(jié)果Ficoll密度梯

4、度法得到的胰島數(shù)量(n=20)為85．20±10．19，濾網(wǎng)法得到的胰島數(shù)量(n=20)為126．40±9．39(P

5、生存時間及免疫學(xué)功能的差異。方法采用尼龍濾網(wǎng)法分離純化胰島，供體胰島植入受體肝內(nèi)及腎包膜下。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定INF-r的含量。。H-TdR同位素?fù)饺敕y定單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)。結(jié)果腎包膜下移植組胰島生存時間(12．18±1．25天)明顯長于肝內(nèi)移植組(7．00±0．70天)(P<0．01)。單項混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯示，肝內(nèi)移植組淋巴細(xì)胞較腎包膜下移植組增殖明顯．(P<0．01)。上清液測IFN—r含量，肝內(nèi)移植組明顯升

6、高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。(P<0．05)。結(jié)論不同移植部位，胰島的生存時間及免疫功能存在顯著差異，腎包膜下是胰島移植的理想部位。 第四部分小鼠同種異體胰島移植中IL-12的作用的研究 目的探討IL—12p40基因敲除是否會避免小鼠移植物的排斥。方法對照組，即野生型組(WT)C57BL／6小鼠(n=10)；試驗組，即IL一12p40K0C57BL／6小鼠組(n=10)。供體為BALB／c小鼠，每只受體腎包膜下移植500個新鮮

7、胰島，移植后每天檢測血糖。結(jié)果STZ誘導(dǎo)后小鼠血糖很快升高，數(shù)天即達(dá)到糖尿病狀態(tài)。如果不予胰島移植進(jìn)行治療，小鼠于第10天起出現(xiàn)死亡。移植術(shù)后，．受體的血糖水平兩天內(nèi)即降至正常。試驗組和對照組的胰島生存時間，排斥速度基本相似。對照組，生存時間9．7±2．1days(n=6)。IL-12p40KO組，生存時間為10．0±2．9days(n=7)。結(jié)論IL一12p40基因敲除小鼠，出現(xiàn)Th1向Th2的免疫偏離，但這種免疫偏離不延長胰島移植物