胰島移植在大鼠糖尿病腎病中的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）作為目前糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響了糖尿病患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。其以腎小球基底膜增厚，基質(zhì)沉積及濾過(guò)屏障損傷導(dǎo)致的持續(xù)性高蛋白尿?yàn)橹饕卣?，最終導(dǎo)致終末期腎功能衰竭。如何預(yù)防和治療糖尿病腎病已成為當(dāng)今糖尿病并發(fā)癥的主要研究方向之一。近幾年來(lái)，胰島移植已經(jīng)逐漸被認(rèn)為是一種具有潛在治愈糖尿病及其相關(guān)并發(fā)癥的重要治療方法。而在糖尿病腎病的治療中，胰島移

2、植也具備了常規(guī)胰島素治療所不具備的某些有利因素，在治療、甚至逆轉(zhuǎn)糖尿病腎病中發(fā)揮著重要作用。本研究中大鼠胰島細(xì)胞團(tuán)經(jīng)分離純化后進(jìn)行腎被膜下移植，探討胰島移植對(duì)大鼠糖尿病腎病的改善甚至逆轉(zhuǎn)作用，并評(píng)價(jià)其中相關(guān)信號(hào)通路的表達(dá)及作用機(jī)制。同時(shí)，對(duì)胰島素與胰島移植等不同處理方法在糖尿病腎病中的治療效果進(jìn)行評(píng)估和比較，為促進(jìn)現(xiàn)有的臨床胰島移植的應(yīng)用和發(fā)展提供一定的研究基礎(chǔ)。
　　方法：
　　用于造模的大鼠禁食12h后，通過(guò)腹腔注射鏈脲

3、佐菌素（STZ,55mg/kg）誘導(dǎo)建立大鼠糖尿病模型。一周后通過(guò)尾靜脈取血測(cè)定血糖濃度，當(dāng)連續(xù)三日測(cè)定血糖濃度均大于16.67mmol/L時(shí)，可確認(rèn)大鼠糖尿病模型建立成功。糖尿病模型建立成功后12周，取造模大鼠腎臟標(biāo)本并通過(guò)透射電子顯微鏡觀察大鼠腎小球內(nèi)足細(xì)胞、基底膜及濾過(guò)屏障等微觀結(jié)構(gòu)損傷的變化情況，并分別測(cè)定尿微量白蛋白、隨機(jī)尿蛋白等濃度與尿肌酐的比值，以衡量糖尿病大鼠腎臟損傷程度，并參照建模標(biāo)準(zhǔn)判斷大鼠糖尿病腎病模型的建立是否成

4、功。糖尿病腎病建立成功后，將 DN大鼠隨機(jī)分成胰島移植組（IT組）、胰島素組（IN組）和陽(yáng)性不處理組（DN組），每組分別進(jìn)行不同治療方法處理。同時(shí)，將8只正常大鼠作為陰性對(duì)照組（NC組）。各組大鼠的體重、血糖濃度及尿液相關(guān)指標(biāo)每周測(cè)定3次并做好記錄。處理4周后，各處理組大鼠頸椎脫臼處死，留取腎臟、血液等標(biāo)本以待檢測(cè)。通過(guò) HE和 PAS染色觀察各組小鼠腎臟內(nèi)腎小球和腎小管等病理變化嚴(yán)重程度；通過(guò)免疫熒光和免疫組化檢測(cè)胰島素（Insuli

5、n）、足細(xì)胞蛋白（Synaptopodin）、TGF-β1、CTGF、MCP-1、HGF及α-SMA等指標(biāo)的表達(dá)，并通過(guò)western blot對(duì)相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。此外，運(yùn)用透射電鏡觀察各組腎臟內(nèi)部微觀結(jié)構(gòu)的變化及不同處理后的改善程度。
　　結(jié)果：
　　DN大鼠在胰島移植后，血糖出現(xiàn)明顯降低，并且直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束均能持續(xù)穩(wěn)定在正常水平（5.96±1.81 mmol/L）；HE及PAS染色結(jié)果顯示，移植大鼠腎臟系膜基質(zhì)增

6、生、腎小球毛細(xì)血管袢及局部基底膜增厚等病變均顯著改善，而胰島素處理組大鼠仍存在較明顯腎小球糖原沉積、腎小球肥大及小球和小管細(xì)胞異常增生等病理變化。尿液指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果也表明，胰島移植后DN大鼠尿蛋白及尿微量白蛋白與尿肌酐比值明顯下降，這表明胰島移植能夠顯著改善和保護(hù)大鼠腎功能。此外，透射電鏡觀察結(jié)果顯示，腎小球內(nèi)基底膜增厚、足細(xì)胞損傷及足突融合等微觀結(jié)構(gòu)病變?cè)谝葝u移植后也得到了明顯改善。免疫組化及 WB結(jié)果顯示，糖尿病腎病大鼠在胰島移植后，

7、腎纖維化水平的改善也較明顯。
　　結(jié)論：
　　結(jié)果表明胰島移植對(duì)糖尿病腎病大鼠血糖調(diào)控、腎功能損傷及腎纖維化等均具有明顯的改善和治療作用，甚至在一定程度上逆轉(zhuǎn)了糖尿病腎病的發(fā)展。而結(jié)果對(duì)比也顯示，胰島移植的治療效果也顯著優(yōu)于單純胰島素治療。移植后的胰島在體內(nèi)除了能夠分泌胰島素外，還能分泌胰高血糖素，胰島素原及C肽等，對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟結(jié)構(gòu)及功能損傷起著重要的改善和保護(hù)作用，這也在一定程度上為治愈或預(yù)防糖尿病病人發(fā)展成糖尿病