肽抗生素hPAB-β多拷貝串聯(lián)體的設(shè)計(jì)、表達(dá)與純化.pdf

1、肽抗生素(peptide antibiotics)是近年來發(fā)現(xiàn)的生物體基因編碼的具有抗微生物活性的小肽,是生物體天然免疫的重要組成部分.在已分離的800多種肽抗生素中,絕大多數(shù)具有良好的抗菌活性和抗菌廣譜性,在臨床病原菌對傳統(tǒng)抗生素耐藥性日益嚴(yán)重的今天,肽抗生素作為一種新型的抗感染制劑,其研究倍受人們關(guān)注.該室曾用簡并引物從人皮膚角色形成細(xì)胞中克隆到一人β型肽抗生素,稱hPAB-β,并根據(jù)hPAB-β融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)量達(dá)到菌體

2、總蛋白40﹪.然而,由于目標(biāo)蛋白hPAB-β(4.3kD)在整個(gè)融合蛋白分子(23.6kD)中只占約1/6,其實(shí)際表達(dá)量占菌體總蛋白的比率(表達(dá)率)僅約7﹪,產(chǎn)量依然低下.為實(shí)現(xiàn)hPAB-β的高效率制備,該研究首先利用同尾酶法設(shè)計(jì)并構(gòu)建了hPAB-β多拷貝串聯(lián)體重組質(zhì)粒,并從得到的串聯(lián)體基因工程菌(工程菌)中篩選出最佳工程菌,對其發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,經(jīng)過對表達(dá)產(chǎn)物的純化,最終得到了具有抗菌活性的目標(biāo)肽抗生素hPAB-β.綜上所述,該研究