靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφ炎性介質(zhì)表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:過(guò)度炎癥反應(yīng)不僅在經(jīng)久難愈的慢性病中嚴(yán)重影響著人類(lèi)的生活質(zhì)量,而其過(guò)度、失控性的全身炎癥反應(yīng)所導(dǎo)致的廣泛而嚴(yán)重的組織結(jié)構(gòu)和生理功能的損害則直接危害著患者的生命,因此,除了原發(fā)病的治療以外,抗炎已成為臨床治療的基本策略.基于NF-κB是控制炎性因子基因表達(dá)的瓶頸,靶向NF-κB的抗炎治療成為國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn),圈套策略以其特異性及高效性有著其他策略無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì),成為一種新型的基因治療方案.該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成靶向NF-κB的啞鈴形

2、圈套ODNs,并驗(yàn)證其抗炎作用.材料與方法:(1)以陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體,將熒光標(biāo)記的圈套ODNs(2.0μg/ml)轉(zhuǎn)染入純化的大鼠pMφ細(xì)胞,分別在30min、1h,3h,6h,9h,12h,18h,24h用熒光顯微鏡及激光共聚焦顯微鏡觀(guān)察熒光標(biāo)記的圈套ODNs在細(xì)胞內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化.(2)用免疫組化法測(cè)大鼠pMφ細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65在LPS刺激前及刺激后1h的變化.(3)用ELISA法及RT-PCR法測(cè)TNFα、IL-6、IL-10在

3、LPS刺激前及刺激后1、2、6、12、18、24h蛋白及mRNA水平的變化.(4)以陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體,將圈套ODNs轉(zhuǎn)染大鼠pMφ細(xì)胞6h后用LPS(10μg/ml)刺激,以陽(yáng)離子脂質(zhì)體、無(wú)關(guān)ODNs及單純LPS刺激組作對(duì)照,用ELISA法及RT-PCR法測(cè)圈套ODNs的不同濃度(2、4、8μg/ml)及不同時(shí)間(轉(zhuǎn)染后8、12、18h)對(duì)TNFα、IL-6、IL-10在蛋白及mRNA水平的影響.結(jié)論:(1)以陽(yáng)離子脂質(zhì)體為載體的啞鈴