非酒精性脂肪性肝炎肝組織TNFα、TGFβ1、Leptin及ERK1-2的表達(dá)及藥物干預(yù).pdf

1、目的：通過高脂飼料建立與人類非酒精性脂肪肝NAFLD)發(fā)病過程相似的NAFLD大鼠動物模型，探討脂質(zhì)代謝紊亂、胰島素抵抗(IR)、炎癥反應(yīng)及信號傳導(dǎo)通路在NAFLD發(fā)病機(jī)制中的作用；觀察纈沙坦對NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝、IR、炎癥反應(yīng)及信號傳導(dǎo)通路的影響，為臨床上對NAFLD的藥物治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：48只雄性SD大鼠，常規(guī)給予普通飼料喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成2組：N組(正常對照組)：16只；M組(高脂模型組)：32只。N

2、組給予普通飼料喂養(yǎng)，M組給予高脂飼料喂養(yǎng)。于第11周末各組分別隨機(jī)處死8只大鼠，比較兩組大鼠的肝組織的石蠟病理切片和血清生化的檢測結(jié)果，高脂模型建立成功后，結(jié)束造模實(shí)驗(yàn)。于第12周開始N組改稱為N0組，普通飼料喂養(yǎng)，每天給以生理鹽水2mL/只灌胃5周；隨機(jī)將高脂模型組SD大鼠分成3組：M0組(高脂模型對照組)，繼續(xù)高脂飼料飲食，每天給予生理鹽水2mL/只灌胃5周；GO組(飲食治療對照組)，每天給以生理鹽水2mL/只灌胃5周；G(纈沙坦治

3、療組)，每天給予纈沙坦16.8 mg/Kg·d灌胃5周，G0、G組改為基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。灌胃結(jié)束后繼續(xù)飼養(yǎng)一周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束。SD大鼠分籠喂養(yǎng)，飲水和進(jìn)食不限。處死前隔夜禁食并稱重，心臟取血離心分離血清，檢測血清TG、TC、LDL、FBS、FINS；并計(jì)算空腹胰島素抵抗指數(shù)(FIRI)；取出整個(gè)的肝臟組織標(biāo)本，沖洗后，稱量其濕重，并計(jì)算肝指數(shù)；用ELISA方法檢測肝組織TNFα、TGFβ1、Leptin和ERK1/2的含量；肝組織石蠟切片后行H

4、E染色，評估肝組織脂肪變性程度；行Masson(馬松)染色，評估肝組織纖維化程度。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：⑴N組、N0組與同期M組、M0組體重、肝濕重、肝指數(shù)，血清TG、TC、LDL、FBS、FIRI及肝組織TNF-α、TGF-β1、Leptin、ERK1/2水平相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；⑵大鼠肝臟脂肪變程度、小葉內(nèi)炎癥、肝細(xì)胞氣球樣變、肝纖維化程度變化：光學(xué)

5、顯微鏡下，M組大鼠的肝臟細(xì)胞中出現(xiàn)小空泡樣脂肪變；M0組的大鼠肝臟出現(xiàn)彌漫性脂肪變性，并有炎癥細(xì)胞浸潤和輕微的纖維化。G0組、G組脂肪變性程度有所減輕，炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，壞死程度有所減輕；⑶與N0組相比較，M0組SD大鼠血清TG、TC、LDL水平均明顯增高，比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；G0組、G組與M0組TG、TC、LDL比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；G組大鼠血清TG、TC較G0組低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)

6、；⑷與N0組相比較M0組SD大鼠血清FBS、FINS、FIRI水平均明顯增高，比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；G0組、G組與M0組FINS、FIRI比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；G組與M0組FBS比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；G組與G0組FBS、FINS、FIRI比較均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；⑸與N0組相比較M0組SD大鼠肝組織TNFα、TGFβ1、Leptin、ERK1/2水平均明顯增高，比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差

7、異(P<0.05)；G組與M0組肝組織TNFα、TGFβ1、ERK1/2比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；G0組與M0組肝組織ERK1/2比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；G組與G0組肝組織TNFα、TGFβ1比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　 結(jié)論：①用高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)SD大鼠10周可形成與人類NAFLD發(fā)病過程相似的NAFLD動物模型；②NAFLD形成過程中肝組織中炎癥因子表達(dá)升高，ERK1/2傳導(dǎo)通路受到受到抑制；