苜蓿皂苷提取工藝及其減肥作用研究.pdf

1、苜蓿為多年生草本豆科苜蓿屬植物，是世界上栽培歷史悠久、種植面積較大的牧草，它以產(chǎn)量高、營(yíng)養(yǎng)豐富、適口性好而享有“牧草之王”的美譽(yù)。目前，苜蓿葉蛋白(MLP)、苜蓿皂苷(MSS)、苜蓿多糖(MPS)等提取物的研究已成為苜蓿研究的熱點(diǎn)。其中，MSS的生理活性及藥理作用的研究引起了人們很大的興趣。皂苷是廣泛存在于自然界的一種天然物質(zhì)，是由糖中羥基或非糖類化合物的羥基以縮醛(苷鍵)脫水縮合而成的環(huán)狀縮醛衍生物。苜蓿的根、莖、葉中都含有一定量的皂

2、苷，其化學(xué)成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜，由甾類化合物的寡糖苷及三萜類化合物的寡糖苷所構(gòu)成。提取MSS一般采用有機(jī)溶劑萃取法和大孔吸附樹脂法。大孔吸附樹脂法是近年來用于天然產(chǎn)物分離的一種新方法，具有工藝簡(jiǎn)便、條件溫和、可反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，用于皂苷分離純化的文獻(xiàn)報(bào)道逐年增加。本實(shí)驗(yàn)采用大孔吸附樹脂分離純化苜蓿水提取液中的皂苷，確定該法從苜蓿中提取MSS的最佳工藝條件。 MSS具有多種藥理活性和生物活性。如可抑制膽固醇在腸道中吸收，降低血清膽固醇，防治

3、心腦血管疾病，還可以作為食品的天然甜昧劑、增味劑和抗氧化劑。Malinow報(bào)道MSS可有效地治療實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥，并在幾種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中都證明具有療效。叢學(xué)滋等人也對(duì)MSS的降低血清膽固醇及減輕實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化作用進(jìn)行了研究，證明MSS對(duì)改善心外膜下的較大冠狀動(dòng)脈的內(nèi)膜阻塞程度有明顯作用。而有關(guān)MSS減肥作用的研究未見報(bào)道，該實(shí)驗(yàn)將MSS經(jīng)口給予實(shí)驗(yàn)性肥胖模型大鼠，觀察MSS的減肥作用，以期進(jìn)一步開發(fā)苜蓿的新用途。目的：確定大孔吸附樹脂

4、分離純化MSS的工藝參數(shù)。 方法：以MSS的吸附量、解吸率為指標(biāo)，分別對(duì)DM-301、HPD700、HPD600、HPD450、HPD300、HPD100、HZ-841、AB-8、D-101型大孔吸附樹脂的吸附和解吸性能進(jìn)行考察。選擇吸附、解吸效果最佳樹脂作為分離MSS所用大孔樹脂。用該樹脂吸附MSS，考察吸附時(shí)間、上樣溶液濃度、溶液pH值、溶液溫度對(duì)吸附量的影響；使用動(dòng)態(tài)吸附-解吸法考察，以10％乙醇、20％乙醇、30％乙醇、

5、40％乙醇、50％乙醇、60％乙醇和70％乙醇洗脫，測(cè)定洗脫液中MSS含量，計(jì)算洗脫率，確定洗脫溶媒的濃度和用量。 結(jié)果：通過靜態(tài)吸附法確定了AB-8型大孔吸附樹脂能有效分離純化MSS。具體工藝參數(shù)為：通過靜態(tài)吸附性能的考察，確定MSS最佳吸附上樣濃度為0.1％，pH值為2.0，溶液溫度為30℃，吸附時(shí)間為11小時(shí)；通過動(dòng)態(tài)解吸性能的考察，表明60％的乙醇溶液5.0 BV可將MSS完全洗脫。 結(jié)論：AB-8型大孔吸附樹脂

6、能有效分離純化富集MSS，60％的乙醇溶液5.0 BV可將MSS完全洗脫。 目的：研究MSS的減肥作用并探討其可能的作用機(jī)制。 方法：將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組(每組10只)：①空白對(duì)照組；②肥胖模型對(duì)照組；③MSS高劑量組(2.0g/kg)；④MSS中劑量組(1.0 g/kg)；⑤MSS低劑量組(0.5g/kg)；⑥陽(yáng)性藥(曲美)對(duì)照組(2.5mg/kg)?？瞻讓?duì)照組給予正常飼料，其余各組給予高能營(yíng)養(yǎng)飼料。同時(shí)M

7、SS各組分別灌胃MSS高、中、低劑量；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃曲美懸浮液，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃等容積的蒸餾水，灌胃體積10ml/kg體重。每周稱重2次，連續(xù)給藥70天，末次給藥后斷食12h，腹腔注射20％烏拉坦麻醉(6ml/kg)，腹主動(dòng)脈取血并取材。測(cè)定腎臟及生殖器周圍脂肪重量，測(cè)量脂肪細(xì)胞最大長(zhǎng)徑、最大寬徑及平均面積，測(cè)定肝臟總膽固醇含量，血液學(xué)指標(biāo)觀察全血血紅蛋白含量(Hgb)、血清白蛋白含量(SAB)、血液葡萄糖含量(BGLu)。

8、 結(jié)果 1.MSS對(duì)營(yíng)養(yǎng)肥胖型大鼠體重的影響：MSS中劑量組從給藥第16天，高劑量組從給藥第30天開始大鼠體重明顯減輕，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，并一直持續(xù)到給藥70天停藥時(shí)。MSS對(duì)肥胖大鼠體重的增長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。 2.MSS對(duì)營(yíng)養(yǎng)肥胖型大鼠體內(nèi)脂肪和脂肪細(xì)胞的影響：MSS高、中劑量組與肥胖模型組比較，體脂含量明顯減少(P＜0.05，P＜0.01)；鏡下觀察脂肪細(xì)胞，MSS高、中劑量組與肥胖

9、模型組相比，視野內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)目明顯增多(P＜0.01)，細(xì)胞最大長(zhǎng)徑、最大寬徑和平均面積均明顯減小(P＜0.01)，MSS低劑量組脂肪細(xì)胞最大寬徑、平均面積與模型對(duì)照組比較也明顯減小(P＜0.05)；表明MSS具有較好的減肥效果。 3 MSS對(duì)營(yíng)養(yǎng)肥胖型大鼠肝臟重量和肝臟總膽固醇含量的影響：與模型對(duì)照組比較，MSS高、中、低劑量組均能明顯降低營(yíng)養(yǎng)肥胖型大鼠肝臟重量(P＜0.05)、肝臟重量系數(shù)(P＜0.05，P＜0.01)和肝臟總膽固醇