油茶皂苷A抗腫瘤作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：油茶皂苷A為（sasanquasaponin A）油茶（Camellia oleifera Abel）根提取分離的抗腫瘤有效成分，但其抗腫瘤作用及其機(jī)制還不明確。本課題采用體外和體內(nèi)多種實(shí)驗(yàn)方法對(duì)油茶皂苷的抗肝癌、肺癌作用及機(jī)制進(jìn)行初步研究。
　　方法：采用MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察油茶皂苷A對(duì)肝癌（BEL-7402）、肺癌（A549）細(xì)胞的增殖的影響；同時(shí)采用吉姆薩染色、觀察 BEL-7402、A549細(xì)胞形態(tài)變化；在小鼠體內(nèi)

2、，建立H22肝癌移植瘤模型，考察油茶皂苷A體內(nèi)抗腫瘤作用，HE染色觀察小鼠臟器組織及腫瘤組織形態(tài)變化，透射電鏡觀察腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化；Hoechest33342染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)；流式細(xì)胞術(shù)檢測A549、BEL-7402細(xì)胞細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡變化；細(xì)胞透射電鏡觀察細(xì)胞自噬和凋亡。通過Western Blot法檢測BEL-7402和A549凋亡蛋白caspase-3、Bcl-2和自噬相關(guān)蛋白LC3等的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果

3、顯示油茶皂苷A對(duì)肝癌BEL-7402和肺癌A549細(xì)胞增殖有抑制作用；油茶皂苷A作用A549、BEL-7402細(xì)胞24 h后，吉姆薩染色觀察發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞體積變小，細(xì)胞核濃縮，細(xì)胞碎裂；Hoechest33342染色發(fā)現(xiàn)隨著油茶皂苷A劑量的增加，發(fā)出強(qiáng)烈藍(lán)色熒光的細(xì)胞越來越多，凋亡細(xì)胞增多；細(xì)胞透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中出現(xiàn)自噬泡，細(xì)胞核膜破裂、染色質(zhì)聚集、出現(xiàn)凋亡小體，提示細(xì)胞自噬和凋亡；油茶皂苷A（1、2 mg/kg）能抑制H22荷瘤生長

4、（P<0.05，P<0.001），對(duì)小鼠胸腺表現(xiàn)出一定的毒性，并在2mg/kg時(shí)出現(xiàn)小鼠死亡；油茶皂苷 A（6.25，12.50，18.75μM）能顯著提高A549和BEL-7402細(xì)胞凋亡率（P<0.01，P<0.001）；油茶皂苷A能阻滯A549細(xì)胞于細(xì)胞周期G2期，阻滯BEL-7402細(xì)胞于S期；Western Blot法結(jié)果表明油茶皂苷A（18.75μM）可顯著上調(diào)BEL-7402，A549細(xì)胞中Caspase-3的表達(dá)（P<0