油茶皂苷B抗腫瘤作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　油茶皂苷B是從油茶根中提取、分離的三萜皂苷單體，前期研究發(fā)現(xiàn)有抗腫瘤作用，但其抗腫瘤作用機制還不清楚。因此，本研究采用體內外抗腫瘤實驗方法來探討油茶皂苷B的抗腫瘤作用和機制。
　　方法：
　　在體外，采用MTT法檢測油茶皂苷B對腫瘤細胞增殖的影響；采用吉姆薩染色法觀察細胞形態(tài)變化；Hoechst33342染色法觀察細胞凋亡形態(tài)；Annexin V-FITC/PI雙染分析法檢測腫瘤細胞的凋亡率；采用細胞周期法

2、檢測油茶皂苷B對腫瘤細胞周期的影響；同時還采用了MDC染色、MDC熒光強度、透射電鏡以及ROS活性氧測試等實驗方法來探討油茶皂苷B誘導腫瘤細胞自噬；用Western blot方法分析油茶皂苷B對caspase3、Bcl-2、LC3、P53蛋白表達的影響；體內，采用小鼠H22實體瘤模型探討油茶皂苷B在體內的抗腫瘤作用。
　　結果：
　　MTT法結果顯示，油茶皂苷B可呈時間和劑量依賴關系抑制SMMC-7721人肝癌細胞和MCF-

3、7人乳腺癌細胞的增殖；吉姆薩染色結果提示油茶皂苷B給藥組細胞形態(tài)皺縮，變圓，染色加深，細胞核濃縮；Hoechst33342染色觀察到隨著油茶皂苷B劑量的升高，細胞凋亡的數(shù)目變多；同時，Annexin V-FITC/PI雙染結果提示油茶皂苷B可誘導人肝癌細胞SMMC-7721和人乳腺癌細胞MCF-7發(fā)生凋亡，油茶皂苷B給藥組誘導SMMC-7721和MCF-7細胞早期凋亡率和晚期凋亡率明顯增加；通過對細胞周期的分析，油茶皂苷B誘導SMMC-

4、7721細胞周期阻滯在G2/M期，呈劑量依賴性增加。MDC熒光染色和透射電鏡結果分析可知，油茶皂苷B可誘導腫瘤細胞自噬，胞漿內自噬泡明顯增加；ROS實驗結果分析可知，油茶皂苷B可誘導腫瘤細胞內ROS的釋放；為了驗證油茶皂苷B誘導的自噬與誘導的凋亡之間的關系，通過Annexin V-FITC/PI分析結果可知，自噬抑制劑氯喹可抑制油茶皂苷B誘導的SMMC-7721和MCF-7腫瘤細胞凋亡，主要是影響早期凋亡的細胞數(shù)；Western blo

5、tting結果表明，油茶皂苷B下調Bcl-2和上調Caspase3、p53與LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值，均呈現(xiàn)出劑量依賴關系；油茶皂苷B能抑制或顯著性抑制H22移植瘤生長(P<0.05)，且抑制率與劑量呈正相關，0.5mg/kg抑制率為37.255％；1.0mg/kg抑制率為46.249%，但高劑量表現(xiàn)出一定的毒性。
　　結論：
　　油茶皂苷B可誘導SMMC-7721細胞和MCF-7細胞凋亡與自噬，其機制通過調節(jié)p53蛋白表