淮陰非綜合征耳聾家系永生細(xì)胞系的建立及病因?qū)W的研究.pdf

1、一.非綜合征耳聾大家系永生細(xì)胞系的建立及幾種EB病毒轉(zhuǎn)化外周血淋巴細(xì)胞建系方法的探討 江蘇淮陰耳聾家系是迄今世界上最大的非綜合征耳聾家系之一，該家系發(fā)病呈典型的母系遺傳特征，且線粒體A1555G突變是其致病的主要分子生物學(xué)原因。永久保存珍貴的家系材料，是對該家系進(jìn)行深入研究的基礎(chǔ)，為此我們實(shí)驗(yàn)室采用EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV)轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞的方法對該家系行了建系工作。在建系過程中我們使用了四種不同的方法

2、，分別為：微量全血法1株，凍存全血法1株，凍存白細(xì)胞法14株及環(huán)孢霉素A(CyA)法36株，共計(jì)52株。同時，對這四種轉(zhuǎn)化方法的優(yōu)缺點(diǎn)做了簡單的比較分析。 二.核基因參與人類線粒體12SrRNA突變相關(guān)非綜合征耳聾的臨床表型 人類線粒體12SrRNAA1555G突變可引起母系遺傳性非綜合征耳聾，并提高氨基糖甙類藥物對該類型耳聾的誘導(dǎo)作用。前期研究已證實(shí)江蘇淮陰非綜合征耳聾大家系中，其個體發(fā)病呈典型的母系遺傳特征，臨床可表

3、現(xiàn)為先天性耳聾，中年進(jìn)行性耳聾乃至完全正常的表型。同時發(fā)現(xiàn)A1555G突變是引起該家系耳聾的主要原因。我們用EB病毒轉(zhuǎn)化的方法對該家系個體行建系工作后，用35S-蛋氨酸摻入標(biāo)記測定蛋白合成及細(xì)胞倍增時間測定的方法對家系中17個個體的類淋巴母細(xì)胞進(jìn)行分析，其中包括具有耳聾癥狀的個體7人(患者組)，具有同質(zhì)性A1555G突變但表型正常的個體6人(攜帶組)，正常婚配對照5人，與正常婚配對照相比，患者組與攜帶組在線粒體蛋白合成速率及在葡萄糖或半