山西省非綜合征型耳聾患者耳聾基因的檢測分析.pdf

1、目的:
　　本課題采用多種檢測技術(shù)對非綜合征性耳聾患者的致病基因進(jìn)行篩查，統(tǒng)計常見基因的突變位點，尋找新的致病基因，為疾病的產(chǎn)前診斷、早期篩查及治療提供依據(jù)；同時也為耳聾基因的診斷提供了更快速、簡便、靈敏的方法。
　　方法:
　　由山西省太原市中心醫(yī)院中心實驗室收集山西省各地區(qū)聾啞學(xué)校的耳聾患者標(biāo)本300例，年齡均在8-23歲之間。納入標(biāo)準(zhǔn)為：除聽力下降以外不伴有其他任何臨床癥狀。通過對患者臨床癥狀，檢驗結(jié)果及相關(guān)檢查

2、確診并建立資料庫。由患者本人或監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書后采集外周血。采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法對4個常見基因二十個位點進(jìn)行篩查，并統(tǒng)計突變位點，對未發(fā)生突變的標(biāo)本選取10例用基因捕獲+二代測序的方法進(jìn)行檢測，篩選出新的熱點致病基因，并合成相應(yīng)的引物，用Sanger測序的方法對剩余標(biāo)本進(jìn)行檢測，尋找致病突變位點，用100例正常標(biāo)本作為對照。
　　結(jié)果:
　　1．通過基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法對300例耳聾患者標(biāo)

3、本檢測后，有152例發(fā)生突變。
　　2．在剩余的148例標(biāo)本中選取10例，經(jīng)過基因捕獲+二代測序的方法進(jìn)行檢測后，有3例發(fā)生TRIOBP基因的突變，2例發(fā)生TPRN基因的突變。
　　3．通過對上述兩個基因的相應(yīng)外顯子進(jìn)行引物的設(shè)計與合成，對剩余的138例標(biāo)本用Sanger測序進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)TRIOBP基因中，131例攜帶c.3559 T>C（p.F1187L）,11例攜帶c.3070 C>A(p.P1024 T)的突變，通過

4、正常對照的驗證，c.3559 T>CT可能是SNP位點，而c.3070 C>A在正常對照組中未被發(fā)現(xiàn)，該位點能否導(dǎo)致耳聾，還有待進(jìn)一步驗證；TPRN基因未見突變。
　　結(jié)論:
　　1．GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體DNA這四個基因是山西省耳聾患者的主要致病基因，但各突變位點的攜帶率與全國其他地區(qū)有明顯的差異；
　　2.TRIOBP和TPRN基因的突變與非綜合征性耳聾的發(fā)生有關(guān)；
　　3.基質(zhì)輔助激光解