山西省非綜合征型耳聾患者耳聾基因的檢測(cè)分析.pdf

1、目的:
　　本課題采用多種檢測(cè)技術(shù)對(duì)非綜合征性耳聾患者的致病基因進(jìn)行篩查，統(tǒng)計(jì)常見(jiàn)基因的突變位點(diǎn)，尋找新的致病基因，為疾病的產(chǎn)前診斷、早期篩查及治療提供依據(jù)；同時(shí)也為耳聾基因的診斷提供了更快速、簡(jiǎn)便、靈敏的方法。
　　方法:
　　由山西省太原市中心醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室收集山西省各地區(qū)聾啞學(xué)校的耳聾患者標(biāo)本300例，年齡均在8-23歲之間。納入標(biāo)準(zhǔn)為：除聽(tīng)力下降以外不伴有其他任何臨床癥狀。通過(guò)對(duì)患者臨床癥狀，檢驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)檢查

2、確診并建立資料庫(kù)。由患者本人或監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書(shū)后采集外周血。采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法對(duì)4個(gè)常見(jiàn)基因二十個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行篩查，并統(tǒng)計(jì)突變位點(diǎn)，對(duì)未發(fā)生突變的標(biāo)本選取10例用基因捕獲+二代測(cè)序的方法進(jìn)行檢測(cè)，篩選出新的熱點(diǎn)致病基因，并合成相應(yīng)的引物，用Sanger測(cè)序的方法對(duì)剩余標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，尋找致病突變位點(diǎn)，用100例正常標(biāo)本作為對(duì)照。
　　結(jié)果:
　　1．通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法對(duì)300例耳聾患者標(biāo)

3、本檢測(cè)后，有152例發(fā)生突變。
　　2．在剩余的148例標(biāo)本中選取10例，經(jīng)過(guò)基因捕獲+二代測(cè)序的方法進(jìn)行檢測(cè)后，有3例發(fā)生TRIOBP基因的突變，2例發(fā)生TPRN基因的突變。
　　3．通過(guò)對(duì)上述兩個(gè)基因的相應(yīng)外顯子進(jìn)行引物的設(shè)計(jì)與合成，對(duì)剩余的138例標(biāo)本用Sanger測(cè)序進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)TRIOBP基因中，131例攜帶c.3559 T>C（p.F1187L）,11例攜帶c.3070 C>A(p.P1024 T)的突變，通過(guò)

4、正常對(duì)照的驗(yàn)證，c.3559 T>CT可能是SNP位點(diǎn)，而c.3070 C>A在正常對(duì)照組中未被發(fā)現(xiàn)，該位點(diǎn)能否導(dǎo)致耳聾，還有待進(jìn)一步驗(yàn)證；TPRN基因未見(jiàn)突變。
　　結(jié)論:
　　1．GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體DNA這四個(gè)基因是山西省耳聾患者的主要致病基因，但各突變位點(diǎn)的攜帶率與全國(guó)其他地區(qū)有明顯的差異；
　　2.TRIOBP和TPRN基因的突變與非綜合征性耳聾的發(fā)生有關(guān)；
　　3.基質(zhì)輔助激光解