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文檔簡介
1、本文通過小鼠急性腦缺氧實(shí)驗(yàn)、大鼠大腦中動(dòng)脈栓線法局灶性腦缺血(MCAO)損傷模型、對腦血流量影響實(shí)驗(yàn)、抑制血小板聚集及血栓形成實(shí)驗(yàn)、小鼠不完全腦缺血模型、沙土鼠全腦缺血再灌注損傷等實(shí)驗(yàn)和模型,分別從擴(kuò)張腦血管、抑制血小板聚集及血栓形成、抗水腫、抗缺血再灌注損傷、抗自由基和興奮性氨基酸損傷等角度,系統(tǒng)的研究了三七中人參三醇皂苷(PTS)對缺血性腦中風(fēng)的防治作用及其機(jī)制。 方法 1.小鼠急性腦缺氧實(shí)驗(yàn) 小鼠i.p.給
2、藥,每天一次,共3次,末次給藥后30min將小鼠逐只斷頭,立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時(shí)間作為耐缺氧指標(biāo)。 2.大鼠大腦中動(dòng)脈栓線法局灶性腦缺血(MCAO)損傷模型 雄性SD大鼠,i.p.預(yù)防給藥兩次,每天一次,造模前O.5h i.v.給藥1次,造模后4h和10h i.p.給藥兩次。模型建立:分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈,參照Berdson法用4-0尼龍線阻斷大腦中動(dòng)脈。造模成功能夠存活24h的大鼠確定為最后實(shí)驗(yàn)對象,并
3、進(jìn)行行為學(xué)評分后,快速取右腦,并切成三片,將腦前部用于腦含水量測定,中部用于腦梗死面積測定,后部用于病理組織學(xué)檢查。 3.對腦血流量影響實(shí)驗(yàn) 犬靜脈滴注給藥,分別在給藥前和給藥后5、10、15、30、60、120以及180min測定平均動(dòng)脈血壓(MAP)、心率(HR)、腦血流量(CBF)和腦血管阻力(CVR)等指標(biāo)。 4.抑制血小板聚集及血栓形成實(shí)驗(yàn) 抑制血小板聚集:大鼠i.p.給藥,共3次,每天1次。于
4、末次給藥30min后,分別自頸總動(dòng)脈放血,在血樣中加入5μl已稀釋的ADP(終濃度為50μmol/L)反應(yīng)5min后測定最大聚集度。 抑制血栓形成:大鼠經(jīng)4%戊巴比妥鈉i.p.麻醉,舌下靜脈給藥后20min,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸外靜脈。把插入絲線的聚乙烯管的兩端分別插入右側(cè)頸總動(dòng)脈和左側(cè)頸外靜脈,打開動(dòng)脈夾開放血液15min后,中斷血流,迅速取出聚乙烯管中的血栓,在分析天平上稱重,求出血栓抑制率。 5.雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)
5、扎的不完全腦缺血模型 給小鼠i.p.給藥,共3次,每天1次;于末次給藥后30min,麻醉后分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,各組經(jīng)尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)溶液,并分別在注射10min后結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈。在結(jié)扎3h后斷頭取出腦組織,稱重后測腦組織內(nèi)伊文思藍(lán)含量并計(jì)算腦指數(shù)。 6.沙土鼠全腦缺血再灌注損傷模型 采用結(jié)扎沙土鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈15min再灌注24h制備全腦缺血再灌注損傷模型,動(dòng)物隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組、PTS 30mg/k
6、g組、PTS 60mg/kg組、PTS120mg/kg組和陽性對照藥血栓通注射液組。觀察造模24h后PTS對沙土鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、興奮性氨基酸及病理組織學(xué)的影響。 結(jié)果 1.小鼠急性腦缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,PTS注射液30mg/kg以上劑量組給藥后均能顯著延長小鼠斷頭喘息時(shí)間,提示PTS注射液可提高小鼠腦耐急性缺氧的能力以增強(qiáng)對抗腦中風(fēng)的能力。 2.大鼠大腦中動(dòng)脈栓線法局灶性腦缺血(
7、MCAO)損傷模型實(shí)驗(yàn)提示:一定劑量的PTS注射液能改善MCAO大鼠的偏癱體征,縮小腦內(nèi)梗死面積,減輕腦水腫和神經(jīng)元細(xì)胞的繼發(fā)性損害,對MCAO大鼠具有良好的防治作用。 3.腦血流量實(shí)驗(yàn)表明:12.3mg/kg、24.6mg/kg和49.6mg/kg劑量的PTS注射液在給藥后30分鐘內(nèi)均能明顯降低犬腦血管阻力,使腦血流量顯著增加,而對血壓無明顯影響,對心率影響也不明顯,機(jī)制可能與擴(kuò)張腦血管有關(guān)。 4.抑制血小板聚集及血栓
8、形成實(shí)驗(yàn)提示,41.54 mg/kg和83.08mg/kg劑量的PTS注射液對ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集有明顯的抑制作用,且隨著劑量的增大抑制作用逐漸增強(qiáng);抗血栓形成實(shí)驗(yàn)提示,PTS注射液各劑量組能明顯抑制大鼠血栓形成。 5.小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎不完全腦缺血模型實(shí)驗(yàn)表明:與模型組比較, PTS注射液各組腦指數(shù)和腦伊文思藍(lán)含量顯著降低,提示一定劑量的PTS注射液可以抑制小鼠腦缺血引起的腦血管通透性增加,從而降低腦指數(shù),減輕腦水腫
9、。 6.PTS對沙土鼠全腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 組織病理學(xué)檢查表明,同模型組比較,PTS中、高劑量組對沙土鼠腦缺血再灌注致腦組織和神經(jīng)細(xì)胞的病理損傷有較好的改善作用。 腦缺血再灌注24小時(shí)后沙土鼠腦組織SOD活性明顯降低,MDA含量明顯提高,與假手術(shù)相比較均有顯著性差異。PTS給藥組的SOD活性與與模型組相比顯著升高,MDA含量與模型組相比顯著降低,提示PTS對沙土鼠全腦缺血再灌腦組織的自由基損傷有明顯保護(hù)作
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