前列腺癌DNA聚合酶β基因突變、表達(dá)及其調(diào)控研究.pdf

1、前列腺癌是歐洲居第二位的常見男性惡性腫瘤，在美國則超過肺癌居首位。我國前列腺癌的發(fā)病率雖遠(yuǎn)低于西方國家，但隨人均期望壽命的延長(zhǎng)，生活方式及膳食結(jié)構(gòu)的改變，前列腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)日益增多趨勢(shì)。該腫瘤的特點(diǎn)是潛伏性癌，早期診斷困難；治療上化療藥物難以進(jìn)入前列腺癌組織；確診病例因多已轉(zhuǎn)移，手術(shù)根治效果較差。目前其發(fā)生的確切分子事件尚未充分闡明，因此從分子水平揭示前列腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，對(duì)于從基因水平上干預(yù)防治前列腺癌具有重要的理論和實(shí)用意義。

2、 分子腫瘤學(xué)研究表明：腫瘤發(fā)生發(fā)展的根本原因在于基因的損傷和修復(fù)失靈。DNA損傷修復(fù)基因、癌基因、腫瘤抑制基因并稱腫瘤三大基因，存在于人類正常細(xì)胞中，三者相互制約，共同維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)、分化和增殖。任何一種或一類基因的損傷和/或表達(dá)異常均有可能直接或間接干預(yù)其它基因的表達(dá)和功能呈現(xiàn)，進(jìn)而關(guān)聯(lián)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。許多研究表明，除癌基因突變或/和過表達(dá)，腫瘤抑制基因的突變或缺失的致癌途徑外，DNA損傷修復(fù)基因的突變及功能異常，將導(dǎo)致DN

3、A損傷積累，基因組不穩(wěn)定性增加，使細(xì)胞獲得突變表型，亦可能是介導(dǎo)腫瘤發(fā)生的重要分子機(jī)制。 DNA聚合酶p廣泛分布于哺乳類細(xì)胞中，是真核細(xì)胞主要的DNA損傷修復(fù)基因，其DNA序列高度保守，為一看家基因。DNApoip的主要功能是參與DNA的堿基切除修復(fù)。其表達(dá)水平在整個(gè)細(xì)胞周期中相對(duì)穩(wěn)定且不受細(xì)胞周期增殖調(diào)控。許多研究者在多種腫瘤組織和細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)了DNApoip的基因突變或/和過表達(dá)。有關(guān)前列腺癌DNApoiB基因突變的研究國外

4、僅見日本學(xué)者一篇報(bào)道。國人前列腺癌發(fā)生與DNApoip的基因突變、表達(dá)及功能狀態(tài)的系統(tǒng)研究尚未見諸報(bào)道。 本研究利用分子生物學(xué)方法，檢測(cè)了12例前列腺癌組織、人前列腺癌PC3細(xì)胞株及20例良性前列腺增生組織中的DNApolβ基因突變及mRNA表達(dá)水平；構(gòu)建了前列腺癌特異突變DNApoip真核表達(dá)載體，并將其轉(zhuǎn)入NIH/3T3細(xì)胞，初步觀察了其生物學(xué)效應(yīng)。同時(shí)基于前列腺癌組織和細(xì)胞系DNApoiβ的高表達(dá)，本研究還采用RNA干擾(

5、RNAi)技術(shù)，成功構(gòu)建了DNApoiβ靶向siRNA真核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染人前列腺癌PC3細(xì)胞株，觀察了其對(duì)PC3細(xì)胞DNApoiB基因表達(dá)的沉默抑制作用、功能狀態(tài)以及相應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)行為的變化。 第一部分前列腺癌組織及細(xì)胞系中DNApoiβ基因突變的研究 第二部分前列腺癌組織及細(xì)胞系中DNApolβ、PTEN、Ha-ras及SOD2基因的mRNA表達(dá)及相互關(guān)系研究 第三部分重組前列腺特異突變型DNApo堆表達(dá)載

6、體及DNApoip靶向siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定 第四部分重組前列腺癌特異突變DNApoip的表達(dá)載體和DNApolp靶向siRNA表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染NIH/3T3及人前列腺癌PC3細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響綜合研究結(jié)果顯示，不僅DNApolp基因突變可能關(guān)聯(lián)前列腺癌的發(fā)生，DNApolp基因的高表達(dá)亦可能是介導(dǎo)前列腺癌發(fā)生的另一重要分子機(jī)制?；谇傲邢侔〥NApolβ基因的高表達(dá)，尋求包括RNAi在內(nèi)的基因封閉技術(shù)抑制其到適