耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、本研究以冀豆系列十個(gè)大豆品種為主要材料,研究了消毒方法,各個(gè)品種的耐鹽性比較以及對(duì)6-BA濃度的要求,并得到了比較適宜于做轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)的基因型。通過(guò)對(duì)27份大豆品種目標(biāo)基因擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序分析,為耐鹽基因的遺傳轉(zhuǎn)化提供了可參考依據(jù)。綜合分析培養(yǎng)條件,建立了適宜于耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆的遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　對(duì)升汞和氯氣兩種消毒方法處理的10個(gè)大豆品種的染菌率、下胚軸長(zhǎng)、胚根長(zhǎng)、胚根數(shù)目進(jìn)行了比較,結(jié)果表明,氯氣消毒優(yōu)于升汞消毒。
　　設(shè)置

2、NaCl濃度為0mmol/L、50mmol/L、100mmol/L和150mmol/L的鹽脅迫培養(yǎng)基,對(duì)10個(gè)大豆品種的耐鹽性進(jìn)行比較,經(jīng)過(guò)綜合分析,其中冀豆4和冀豆8耐鹽能力較強(qiáng),100mmol/L的鹽脅迫濃度是篩選耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆的適宜濃度。
　　10個(gè)冀豆品種在0.5mg/L質(zhì)量濃度6-BA下再生能力較好;冀豆5,冀豆7和冀豆9芽再生率相對(duì)較高,根再生率適中,適于做后續(xù)遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。
　　在基因GmGT-2A的遺傳轉(zhuǎn)化試

3、驗(yàn)中,萌發(fā)培養(yǎng)基中加入0.5mg/L的6-BA對(duì)冀豆7和冀豆9的遺傳轉(zhuǎn)化起到了一定的提升作用;芽誘導(dǎo)過(guò)程中,加入Km對(duì)子葉再生起到明顯的抑制作用,是很好的抗性芽篩選劑;兩個(gè)冀豆品種之間再生情況也存在差異,冀豆9的再生情況優(yōu)于冀豆7。
　　目標(biāo)基因GmGT-2A的PCR試驗(yàn)結(jié)果顯示:對(duì)擴(kuò)增片段SNP的研究發(fā)現(xiàn)不同大豆品種中突變位點(diǎn)個(gè)數(shù)不同,其中山西A301突變位點(diǎn)數(shù)為13個(gè),而冀豆8突變位點(diǎn)數(shù)為5個(gè),并且所測(cè)品種中都有共同的五個(gè)突變