耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、本研究以冀豆系列十個大豆品種為主要材料,研究了消毒方法,各個品種的耐鹽性比較以及對6-BA濃度的要求,并得到了比較適宜于做轉(zhuǎn)基因試驗的基因型。通過對27份大豆品種目標基因擴增產(chǎn)物的測序分析,為耐鹽基因的遺傳轉(zhuǎn)化提供了可參考依據(jù)。綜合分析培養(yǎng)條件,建立了適宜于耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆的遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　對升汞和氯氣兩種消毒方法處理的10個大豆品種的染菌率、下胚軸長、胚根長、胚根數(shù)目進行了比較,結果表明,氯氣消毒優(yōu)于升汞消毒。
　　設置

2、NaCl濃度為0mmol/L、50mmol/L、100mmol/L和150mmol/L的鹽脅迫培養(yǎng)基,對10個大豆品種的耐鹽性進行比較,經(jīng)過綜合分析,其中冀豆4和冀豆8耐鹽能力較強,100mmol/L的鹽脅迫濃度是篩選耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆的適宜濃度。
　　10個冀豆品種在0.5mg/L質(zhì)量濃度6-BA下再生能力較好;冀豆5,冀豆7和冀豆9芽再生率相對較高,根再生率適中,適于做后續(xù)遺傳轉(zhuǎn)化試驗。
　　在基因GmGT-2A的遺傳轉(zhuǎn)化試

3、驗中,萌發(fā)培養(yǎng)基中加入0.5mg/L的6-BA對冀豆7和冀豆9的遺傳轉(zhuǎn)化起到了一定的提升作用;芽誘導過程中,加入Km對子葉再生起到明顯的抑制作用,是很好的抗性芽篩選劑;兩個冀豆品種之間再生情況也存在差異,冀豆9的再生情況優(yōu)于冀豆7。
　　目標基因GmGT-2A的PCR試驗結果顯示:對擴增片段SNP的研究發(fā)現(xiàn)不同大豆品種中突變位點個數(shù)不同,其中山西A301突變位點數(shù)為13個,而冀豆8突變位點數(shù)為5個,并且所測品種中都有共同的五個突變