TvNHX1基因轉化大豆及其耐鹽性分析.pdf

1、鹽脅迫是影響植物生長、降低農作物產量的主要逆境因素之一，提高作物的耐鹽性已成為世界各國育種工作者研究的焦點。栽培大豆(Glycine max L.)屬于中度耐鹽植物，在我國有很大的種植面積。通過植物基因工程技術將耐鹽基因導入大豆，培育耐鹽大豆新品種，對我國農業(yè)的發(fā)展有重要的現實意義。
　　本研究首先評價分析了4個不同大豆品種對NaCl脅迫的應答與響應。未脅迫條件下，耐鹽性強的品種MDA含量和SOD活性顯著高于耐鹽性弱的品種；脅迫后

2、，其MDA含量降低、SOD活性升高。MDA和SOD可以作為大豆耐鹽性篩選指標。早期的短時脅迫對不同耐鹽性大豆品種的經濟產量影響不同。
　　利用 HindIII和EcoRI對 PBI121-TvNHX1質粒進行雙酶切，獲得35S:TvNHX1:NosT表達卡盒片段，將此片段連接到載體pCAMBIA3300中，經過菌落PCR及酶切鑒定，獲得了重組質粒P33-TvNHX1，成功構建了TvNHX1基因的植物表達載體。
　　將含有Tv

3、NHX1基因的表達載體P33-TvNHX1質粒，采用花粉管通道法轉化大豆5個不同品種。大豆幼苗2片真葉展開后，將其中1片涂上0.03﹪濃度的Basta溶液，對部分轉化株進行PPT抗性篩選，PCR擴增獲得9株導入了TvNHX1基因的大豆植株，其中22293-1，1株、22021-1，2株、21216-6，3株、22451-1，1株、21066-2，2株。RT-PCR檢測到轉基因植株中TvNHX1基因表達。
　　在300 mmol/L

4、 NaCl處理下，轉TvNHX1基因植株根系與地上部的生長狀況均明顯好于對照，轉 TvNHX1基因植株耐鹽性明顯增強。表明 TvNHX1基因可有效提高大豆對NaCl的耐受性。轉空載體pCAMBIA3300基因的植株與非轉基因大豆的表型相同，表明載體骨架對轉化無影響。同時顯示花粉管通道法介導的轉化方法在提高大豆耐鹽性基因工程中是一種可行的技術。
　　對T2代轉TvNHX1基因大豆植株進行PCR檢測，從28株大豆中檢測到20株TvNH