枯草芽孢桿菌B11菌株分泌的拮抗物質(zhì)的純化及基因文庫的構(gòu)建.pdf

1、　　從土壤中分離得到的枯草芽孢桿菌B11菌株對(duì)西瓜枯萎病菌有較強(qiáng)的抑制作用，其抑制機(jī)制之一是產(chǎn)生拮抗物質(zhì)。本研究對(duì)B11菌株分泌的拮抗物質(zhì)進(jìn)行純化，測(cè)定其特性及抑菌機(jī)制，并構(gòu)建B11菌株的基因文庫，取得的結(jié)果如下：　　通過煮沸、DEAE52陰離子交換層析和氧化鋁吸附層析，將B11菌株分泌的兩種拮抗物質(zhì)(拮抗物質(zhì)A、B)純化到薄層層析斑點(diǎn)純。　　兩種拮抗物質(zhì)對(duì)蛋白酶K和胃蛋白酶穩(wěn)定，拮抗物質(zhì)A對(duì)胰蛋白酶也穩(wěn)定，但拮抗物質(zhì)B對(duì)胰蛋白酶部

2、分敏感。這兩種拮抗物質(zhì)均能耐高溫，在121℃仍能保持活性不變?！　煞N拮抗物質(zhì)對(duì)尖孢鐮刀菌西瓜?；?、水稻黃單胞菌水稻變種13751菌株、茄青枯拉爾氏菌P13菌株和水稻紋枯病菌均有較強(qiáng)烈的抑制作用，但拮抗物質(zhì)A對(duì)水稻稻灰梨孢菌沒有抑制作用；而拮抗物質(zhì)B對(duì)水稻稻灰梨孢菌有較強(qiáng)烈的抑制作用。　　用光學(xué)顯微鏡觀察拮抗物質(zhì)A、B對(duì)尖孢鐮刀菌西瓜?；头稚咦拥淖饔?，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，拮抗物質(zhì)A處理尖孢鐮刀菌西瓜?；?V/V=30/100)分生孢子

3、12h后，有40﹪的分生孢子不能萌發(fā)，并出現(xiàn)畸形，24h后全部畸形，48h后可以致使分生孢子膨大和原生質(zhì)濃縮；而拮抗物質(zhì)B處理分生孢子36h后即可使分生孢子膨大和原生質(zhì)濃縮?！　∮卯a(chǎn)生平頭末端的EcoRV酶對(duì)枯草芽孢桿菌B11菌株的總DNA進(jìn)行酶切，末端補(bǔ)平后回收大于48Kb的DNA片段，與cosmid載體連接，連接產(chǎn)物用包裝蛋白包裝后侵染大腸桿菌EPI100，構(gòu)建了約6700個(gè)克隆的DNA文庫。從文庫中隨機(jī)挑選10個(gè)克隆提取質(zhì)粒，質(zhì)